Дивитись що таке "Малі РНК" в інших словниках. Про всі рНК на світі, великих і малих.

Малі РНК, що утворюють шпильки, або короткі РНК, утворюють шпильки (shRNA short hairpin RNA, small hairpin RNA) молекули коротких РНК, що утворюють вторинної структурищільні шпильки. ShRNA можуть бути використані для виключення експресії.

РНК-полімераза- з клітини T. aquaticus у процесі реплікації. Деякі елементи ферменту зроблені прозорими, і ланцюги РНК та ДНК видно більш виразно. Іон магнію (жовтий) розташовується на активній ділянці ферменту. РНК полімеразу фермент, що здійснює… Вікіпедія

РНК-інтерференція- Доставка малих РНК, що містять шпильки, за допомогою вектора на основі лентивірусу та механізм РНК інтерференції в клітинах ссавців РНК інтерференція (а … Вікіпедія

РНК-ген- РНК, що не кодують (non coding RNA, ncRNA), це молекули РНК, які не транслюються в білки. Раніше використовуваний синонім, малі РНК (smRNA, small RNA), в даний час не використовується, тому що деякі РНК, що не кодують, можуть бути дуже ... Вікіпедія

Малі ядерні РНК- (м'яРНК, snRNA) клас РНК, що зустрічаються в ядрі еукаріотичних клітин. Вони транскрибуються РНК полімеразою II або РНК полімеразою III та беруть участь у важливих процесах, таких як сплайсинг (видалення інтронів з незрілої мРНК), регуляції … Вікіпедія

Малі ядерцеві РНК- (м'якРНК, англ. snoRNA) клас малих РНК, що беруть участь у хімічних модифікаціях (метилюванні та псевдоуридилуванні) рибосомних РНК, а також тРНК та малих ядерних РНК. За класифікацією MeSH малі ядерцеві РНК вважаються підгрупою ... Вікіпедія

малі ядерні (низькомолекулярні ядерні) РНК- велика група (105 106) ядерних РНК невеликого розміру (100 300 нуклеотидів), асоційована з гетерогенною ядерною РНК, входять до складу дрібних рибонуклеопротеїнових гранул ядра; М.я.РНК є необхідним компонентом системи сплайсингу.

малі цитоплазматичні РНК- Локалізовані в цитоплазмі невеликі (100300 нуклеотидів) молекули РНК, аналогічні малим ядерним РНК. [Ареф'єв В.А., Лісовенко Л.А. Англо російська тлумачний словникгенетичних термінів 1995 407с.] Тематики генетика EN scyrpssmall cytoplasmic… Довідник технічного перекладача

малі ядерні РНК класу U- група асоційованих з білками невеликих (від 60 до 400 нуклеотидів) молекул РНК, що становлять значну частину вмісту сплайсом та беруть участь у процесі вирізування інтронів; у 4 із 5 добре вивчених типів Usn РНК U1, U2, U4 та U5 на 5… … Довідник технічного перекладача

РНК біомаркери- * РНК біомаркери * RNA biomarkers величезна кількість людських транскриптів, що не кодують синтез білків (нсбРНК або npcRNA). Найчастіше малі (miRNA, snoRNA) і довгі (antisense RNA, dsRNA та інших. види) молекули РНК є… Генетика. Енциклопедичний словник

Книги

• Купити за 1877 грн (тільки Україна)
• Клінічна генетика. Підручник (+CD), Бочков Микола Павлович, Пузирєв Валерій Павлович, Смирніхіна Світлана Анатоліївна. Усі глави перероблені та доповнені у зв'язку з розвитком медичної науки та практики. Істотно доповнено розділи з багатофакторних захворювань, профілактики, лікування спадкових хвороб,…

Довжина siRNA 21-25 п.н. вони утворюються з дцРНК. Джерелом таких РНК можуть бути вірусні інфекції, введені в геном генетичні конструкції, довгі шпильки у складі транскриптів та двонаправлена ​​транскрипція мобільних елементів.
дцРНК нарізаються РНКазою Dicer на фрагменти завдовжки 21-25 п.н. з виступаючими на 2 нуклеотида 3"-кінцями, після чого один з ланцюгів входить до складу RISC і направляє розрізання гомологічних РНК. У складі RISC присутні siRNA, відповідні як плюс-, так і мінус-ланцюгам дцРНК. собою фрагменти довших РНК.siRNA спрямовують розрізання РНК-мішені, оскільки повністю їй комплементарні.У рослин, грибів і нематод у процес придушення експресії генів залучені РНК-залежні РНК-полімерази, для якої siRNA служать ще й праймерами (затравками для синтезу нової РНК). ).ДцРНК, що утворилася, нарізається Dicer, утворюються нові siRNA, які є вторинними.Таким чином відбувається ампліфікація сигналу.

РНК-інтерференція

У 1998 році Craig C. Mello і Andrew Fire опублікували в Nature, в якій говорилося, що дволанцюгові РНК (ДЦРНК) здатні пригнічувати експресію генів. Пізніше з'ясувалося, що чинний початок у цьому процесі-короткі одноланцюгові РНК. Механізм придушення експресії генів за допомогою цих РНК
РНК-інтерференцією, а також РНК-сайленсингом. Такий механізм виявлений у всіх великих таксонів еукаріотів: хребетних та безхребетних тварин, рослин та грибів. 2006 року за це відкриття отримано Нобелівську премію.
Пригнічення експресії може відбуватися на рівні транскрипції або посттранскрипційно. Виявилося, що завжди необхідний подібний набір білків і короткі (21-32 п.н.) РНК .
siRNA регулюють активність генів двома способами. Як говорилося вище, вони спрямовують розрізання РНК-мішеней. Це явище отримало назву "придушення" ( quelling) у грибів, " посттрансляційний сайленсинг генів"у рослин та" РНК-інтерференція У цих процесах беруть участь siRNA довжиною 21-23 п.н. Інший тип впливу-siRNA здатні пригнічувати транскрипцію генів, що містять гомологічні siRNA-послідовності. транскрипційним сайленсингом генів (TGS) і виявлено у дріжджів, рослин та тварин. siRNA спрямовують і метилювання ДНК, що призводить до утворення гетерохроматину та репресії транскрипції. Найкраще TGS вивчений у дріжджів S.pombe, виявлено, що у них siRNA вбудовуються в схожий на RISC білковий комплексназваний RITS. У його випадку, як і у випадку RISC, siRNA взаємодіє з білком сімейства AGO. Ймовірно, siRNA здатна спрямовувати цей комплекс до гена, що містить гомологічний фрагмент siRNA. Після цього білки RITS рекрутують метилтрансферази, в результаті чого в локусі, що кодує ген-мішень siRNA, формується гетерохроматин, і активна експресія гена припиняється.

Роль у клітинних процесах

Яке значення siRNA в клітині?
siRNA залучені на захист клітин від вірусів, репресію трансгенів, регуляцію деяких генів та формування центромірного гетерохроматину. Важлива функція siRNA-пригнічення експресії мобільних генетичних елементів. Таке пригнічення може відбуватися як на рівні транскрипції, так і посттранскрипційно.
Геном деяких з вірусів складається з ДНК, у деяких - з РНК, причому, РНК у вірусів може бути як одно-, так і дволанцюжкової. Сам процес розрізання чужорідної (вірусної) мРНК у разі відбувається як і, як було описано вище, тобто шляхом активації комплексу ферментів RISC. Однак для більшої ефективності рослини та комахи винайшли своєрідний шлях посилення захисної дії siRNA. Приєднуючись до ланцюга мРНК, ділянка siRNA може за допомогою комплексу ферментів DICER спочатку добудувати другий ланцюжок мРНК, а потім розрізати його в різних місцях, створюючи таким чином різноманітні "вторинні" siRNA. Вони, у свою чергу, формують RISC і проводять мРНК через всі стадії, про які йшлося вище, аж до повного знищення. Такі "вторинні" молекули зможуть специфічно зв'язуватися не тільки з тією ділянкою вірусної мРНК, до якої була спрямована "первинна" молекула, але й з іншими ділянками, що різко посилює ефективність клітинного захисту.

Таким чином, у рослин та нижчих тварин організмів siRNA є важливою ланкою своєрідного "внутрішньоклітинного імунітету", що дозволяє розпізнавати і швидко знищувати чужу РНК. У тому випадку, якщо в клітину проник РНК, що містить вірус, така система захисту не дасть йому розмножитися. Якщо ж вірус містить ДНК, система siRNA заважатиме йому виробляти вірусні білки (оскільки необхідна для цього мРНК розпізнаватиметься і розрізатиметься), і за допомогою цієї стратегії уповільнить його поширення по організму.

У ссавців, на відміну комах і рослин, працює й інша система захисту. При попаданні в "зрілу" (диференційовану) клітину ссавця чужої РНК, довжина якої більше 30 п.н., клітина починає синтез інтерферону. Інтерферон, зв'язуючись зі специфічними рецепторами на клітинній поверхні, здатний стимулювати цілу групу генів. У результаті клітині синтезується кілька видів ферментів, які гальмують синтез білків і розщеплюють вірусні РНК. Крім того, інтерферон може діяти і на сусідні, ще не заражені клітини, тим самим блокуючи можливе поширення вірусу.

Як можна помітити, обидві системи багато в чому схожі: вони мають Загальна метата "методи" роботи. Навіть самі назви "interferon" та "(RNA) interference" походять від загального кореня. Але є в них і одна дуже суттєва відмінність: якщо інтерферон за перших ознак вторгнення просто "заморожує" роботу клітини, не дозволяючи (про всяк випадок) виробництво багатьох, у тому числі і "невинних" білків у клітині, то система siRNA відрізняється надзвичайною перебірливістю : кожна siRNA розпізнаватиме і знищуватиме лише свою, специфічну мРНК. Заміна лише одного нуклеотиду всередині siRNA веде до різкого зниження ефекту інтерференції . Жоден з блокаторів генів, відомих досі, не має такої виняткової специфічності по відношенню до свого гена-мішені.

Відкриття РНК-інтерференції дало нову надію у боротьбі зі СНІДом та онкологічними захворюваннями. Можливо, застосовуючи терапію siRNA разом з традиційною антивірусною терапією, можна досягти ефекту потенціювання, коли два впливи призводять до більш вираженого лікувального ефекту, ніж проста сума кожного з них, що застосовується окремо.
Для того, щоб використовувати механізм siRNA - інтерференції в клітинах ссавців, всередину клітин потрібно ввести вже готові дволанцюжкові молекули siRNA. Оптимальний розмір таких синтетичних siRNA при цьому становить 21-28 нуклеотидів. Якщо збільшити її довжину - клітини дадуть відповідь виробленням інтерферону та зниженням синтезу білка. Синтетичні siRNA можуть потрапити як у заражені, так і здорові клітини, і зниження вироблення білків у незаражених клітинах буде вкрай небажаним. З іншого боку, якщо спробувати застосовувати siRNA менші, ніж 21 нуклеотид, різко знижується специфічність її зв'язування з потрібною мРНК та здатність до формування комплексу RISC.

Якщо вдасться тим чи іншим способом доставити siRNA, яка має здатність зв'язуватися з будь-якою ділянкою геному ВІЛ (який, як відомо, складається з РНК), можна спробувати не допустити його вбудовування в ДНК клітини господаря. Крім того, вчені розробляють шляхи впливу на різні етапи розмноження ВІЛ у вже зараженій клітині. Останній підхід не забезпечить лікування, проте може суттєво зменшити швидкість розмноження вірусу та дати загнаній у кут імунній системі шанс "відпочити" від вірусної атаки, і самій спробувати розправитися із залишками захворювання. На малюнку ті два етапи розмноження ВІЛ у клітині, які, як сподіваються вчені, можна заблокувати за допомогою siRNA, відзначені червоними хрестами (етапи 4-5 – вбудовування вірусу у хромосому, та етапи 5-6 – складання вірусу та вихід із клітини).


На сьогоднішній день, щоправда, все вищесказане стосується лише галузі теорії. На практиці терапія siRNA зустрічається із труднощами, обійти які вченим поки що не вдається. Наприклад, у разі антивірусної терапії саме висока специфічність siRNA може зіграти злий жарт: як відомо, віруси мають здатність швидко мутувати, тобто. змінювати склад своїх нуклеотидів. Особливо досягнув успіху в цьому ВІЛ, частота змін якого така, що у людини, яка заразилася одним підтипом вірусу, через кілька років може бути виділений абсолютно несхожий на неї підтип. У цьому випадку змінений штам ВІЛ автоматично стане нечутливим до siRNA, підібраної на початку терапії.

Старіння та канцерогенез

Як і будь-який епігенетичний фактор, siRNA впливають на експресію генів, які змушують "мовчати". Зараз з'являються роботи, в яких описані експерименти щодо виключення генів, асоційованих з пухлинами. Гени вимикають (knock-down) саме з допомогою siRNA. Наприклад, китайські вчені за допомогою siRNA вимикали ген транскрипційного фактора 4 (TCF4), активність якого спричиняє синдром Pitt-Hopkins (дуже рідкісне генетичне захворювання, що характеризується розумовою відсталістю та епізодами гіпервентиляції та апное) та інших розумових захворювань. У цій роботі проводилося вивчення ролі TCF4 у клітинах раку шлунка. Ектопічна експресія TCF4 знижує зростання клітин у лініях клітин раку шлунка, виключення гена TCF4 за допомогою siRNA підвищує міграцію клітин. Отже, можна дійти невтішного висновку, що эпигенетическое виключення (сайленсинг) гена TCF4 грає значної ролі у освіті та розвитку пухлини.

Згідно з дослідженнями в Department of Oncology, Albert Einstein Cancer Center під керівництвом Leonard H. Augenlicht siRNA бере участь у виключенні гена HDAC4, що викликає інгібування зростання ракової пухлини товстої кишки, апоптоз та підвищення транскрипції p21. HDAC4 - це гістонова деацетилаза, яка є тканинноспецифічною, пригнічує диференціювання клітин і її експресія пригнічена протягом процесу диференціювання клітин. У роботі показано, що HDAC4 є важливим регулятором проліферації клітин товстої кишки (що має значення при раковому процесі), а її регулюють siRNA.

У Department of Pathology, Nara Medical University School of Medicine в Японії проводилися дослідження раку простати. Реплікативне старіння клітин- це бар'єр проти неконтрольованого поділу та канцерогенезу. Короткоживучі клітини, що діляться (TAC), є частиною популяції клітин простати, з якої і утворюється пухлина. Японські вчені вивчали причини, якими ці клітини долають старіння. У клітини простати в культурі були трасфековані junB siRNA. У цих клітинах спостерігається підвищений рівеньекспресії p53, p21, p16 і pRb, що виявляється при старінні. Клітини у культурі, які показали знижений рівень p16, використовувалися для наступного етапу. Повторна трансфекція siRNA TAC дозволила клітинам уникнути старіння при інактивації p16/pRb. Крім того, сайленсинг прото-онкогену junB за допомогою junB siRNA викликає інвазію клітин. На підставі цього було зроблено висновок, що junB є елементом для p16 і сприяє клітинному старінню, що перешкоджає малігнізації (злоякісності) TAC. Таким чином, junB є регулятором канцерогенезу в простаті і може бути метою терапевтичного впливу. А регулювати її активність можна за допомогою siRNA.

Подібних досліджень проводиться безліч. В даний час siRNA це не тільки об'єкт, але і інструмент в руках дослідника-лікаря, біолога, онколога, геронтолога. Дослідження зв'язку siRNA з онкологічними захворюваннями, з експресією вік-асоційованих генів-це найважливіше завдання для науки. Пройшло зовсім небагато часу з моменту відкриття siRNA, а скільки з'явилося цікавих досліджень та публікацій, пов'язаних із ними. Можна не сумніватися, що їх вивчення стане одним із кроків людства до перемоги над раком та старінням.

), запобігаючи трансляції мРНК на рибосомах в білок, що нею кодується. Зрештою результат дії малих інтерферуючих РНК ідентичний тому, якби просто знижувалася експресія гена.

Малі інтерферуючі РНК були відкриті в 1999 році групою Девіда Болкомба (англ. David Baulcombe) у Великій Британії як компонент системи пост-транскрипційного сайленсингу генів у рослин (англ. PTGS, en:post-transcriptional gene silencing). Група опублікувала отримані дані в журналі Science.

Дволанцюгові РНК можуть посилювати експресію генів за механізмом, що називається РНК-залежною активацією генів (англ. RNAa, невеликий RNA-індукований ген activation). Показано, що дволанцюгові РНК, комплементарні промоторам генів-мішеней, викликають активацію відповідних генів. РНК-залежна активація при введенні синтетичних дволанцюгових РНК була показана для клітин людини. Не відомо, чи є подібна система у клітинах інших організмів.

Даючи можливість вимкнути по суті будь-який ген за бажанням, РНК-інтерференція на основі малих РНК, що інтерферують, викликала величезний інтерес у фундаментальній і прикладній біології. Число широкоохоплювальних тестів на основі РНК-інтерференції для виявлення важливих генів у біохімічних шляхах постійно зростає. Оскільки розвиток хвороб також зумовлено активністю генів, очікується, що в деяких випадках виключення гена за допомогою малої РНК, що інтерферує, може давати терапевтичний ефект.

Однак застосування РНК-інтерференції на основі малих РНК, що інтерферують, до тварин, і особливо до людей, стикається з безліччю труднощів. В експериментах було показано, що ефективність малих інтерферуючих РНК виявляється різною для різних типів клітин: одні клітини легко відгукуються на вплив малих інтерферуючих РНК і демонструють зниження експресії генів, а в інших подібного не спостерігається, незважаючи на ефективну трансфекцію. Причини цього явища поки що погано вивчені.

Результати першої фази випробувань двох перших терапевтичних препаратів, що діють за механізмом РНК-інтерференції (призначені для лікування макулодистрофії), опубліковані наприкінці 2005 року, показують, що препарати на основі малих РНК, що інтерферують легко переносяться пацієнтами і мають прийнятні фармакокінетичні властивості.

Попередні клінічні випробування малих інтерферуючих РНК, орієнтованих на вірус Ебола, вказують на те, що вони можуть бути ефективними для постконтактної профілактики захворювання. Цей препарат дозволив вижити всій групі піддослідних приматів, які отримали летальну дозу Заїрського Еболавірусу.

Руйнування цільової мРНК може відбуватися також під дією малих інтерферуючих РНК (Small interfering RNA, siRNA). Інтерференція РНК - одне з нових революційних відкриттів у молекулярній біології, а його автори у 2002 р. отримали за нього Нобелівську премію. Інтерферуючі РНК різко відрізняються за будовою від інших типів РНК і є дві компліментарні молекули РНК довжиною приблизно 21-28 азотистих основ, які з'єднані один з одним як нитки в молекулі ДНК. При цьому по краях кожного з ланцюгів siRNA завжди залишається два неспарені нуклеотиди. Вплив здійснюється в такий спосіб. Коли молекула siRNA виявляється усередині клітини, вона першому етапі зв'язується у комплекс із двома внутрішньоклітинними ферментами - хеликазой і нуклеазой. Цей комплекс отримав назву RISC ( R NA- i nduced s ilencing c omplex; silence – англ. мовчати, замовкати; silencing - замовчання, так в англомовній та спеціальній літературі називають процес "вимикання" гена). Далі хеліказа розплітає та роз'єднує нитки siRNA, і одна з ниток (антисмислова за будовою) у комплексі з нуклеазою специфічно взаємодіє з комплементарною (суворо відповідною їй) ділянкою цільової мРНК, що дозволяє нуклеазі розрізати її на дві частини. Розрізані ділянки мРНК далі піддаються дії інших клітинних РНК-нуклеаз, які дорозрізають на більш дрібні шматки.

Виявлені у рослин та нижчих тварин організмів (комахи) siRNA є важливою ланкою своєрідного "внутрішньоклітинного імунітету", що дозволяє розпізнавати і швидко знищувати чужорідну РНК. У тому випадку, якщо в клітину проник РНК, що містить вірус, така система захисту не дасть йому розмножитися. Якщо ж вірус містить ДНК, система siRNA заважатиме йому виробляти вірусні білки (оскільки необхідна для цього мРНК розпізнаватиметься і розрізатиметься), і за допомогою цієї стратегії уповільнить його поширення по організму. Встановлено, що система siRNA відрізняється надзвичайною розбірливістю: кожна siRNA розпізнаватиме і знищуватиме лише свою, специфічну мРНК. Заміна лише одного нуклеотиду всередині siRNA веде до різкого зниження ефекту інтерференції. Жоден з блокаторів генів, відомих досі, не має такої виняткової специфічності по відношенню до свого гена-мішені.

В даний час цей метод використовується в основному в наукових дослідженнях для виявлення функцій різних клітинних білків. Однак потенційно він може бути використаний і для створення лікарських препаратів.

Відкриття РНК-інтерференції дало нову надію у боротьбі зі СНІДом та онкологічними захворюваннями. Можливо, застосовуючи терапію siRNA разом з традиційною антивірусною та протираковою терапією, можна досягти ефекту потенціювання, коли два впливи призводять до більш вираженого лікувального ефекту, ніж проста сума кожного з них, що застосовується окремо.

Для того, щоб використовувати механізм siRNA - інтерференції в клітинах ссавців для терапевтичних цілей, всередину клітин потрібно ввести вже готові дволанцюжкові молекули siRNA. Однак існує ціла низка проблем, які в даний час не дозволяють здійснити це на практиці, а тим більше створити якісь лікарські форми. По-перше, в крові на них діє перший ешелон захисту організму. нуклеази, які розрізають потенційно небезпечні та незвичайні для нашого організму подвійні ланцюжки РНК. По-друге, незважаючи на свою назву, малі РНК все ж таки досить довгі, а, головне, вони несуть негативний електростатичний заряд, що унеможливлює їх пасивне проникнення в клітину. І по-третє, одне з найголовніших питань полягає в тому, як змусити siRNA працювати (або проникати) тільки в певних ("хворих") клітинах, не торкнувшись при цьому здорових? І, нарешті, проблема розміру. Оптимальний розмір таких синтетичних siRNA ті ж 21-28 нуклеотидів. Якщо збільшити її довжину - клітини дадуть відповідь виробленням інтерферону та зниженням синтезу білка. З іншого боку, якщо спробувати застосовувати siRNA менші, ніж 21 нуклеотид, різко знижується специфічність її зв'язування з потрібною мРНК та здатність до формування комплексу RISC. Слід зазначити, що подолання цих проблем є критично важливим не тільки для терапії siRNA, але і для генної терапії взагалі.

У їхньому вирішенні вже зараз досягнуто певного прогресу. Наприклад, вчені намагаються шляхом хімічних модифікацій зробити молекули siRNA. ліпофільнимитобто здатними розчинятися в жирах, з яких складається клітинна мембрана, і таким шляхом полегшити проникнення siRNA всередину клітини. А щоб забезпечити специфічність роботи всередині лише певних тканин, генні інженери включають до складу своїх конструкцій спеціальні регуляторні ділянки, які активізуються і запускають зчитування інформації, укладеної в подібній конструкції (а значить, і siRNA, якщо вона туди включена), тільки в певних клітинах тканин.

Так, дослідники з Медичної Школи в Сан-Дієго при Каліфорнійському Університеті (University of California, San Diego School of Medicine) розробили нову ефективну системудоставки малих інтерферуючих РНК (siRNA), що пригнічують продукцію певних білків, клітини. Ця система має стати основою технології специфічної доставки лікарських препаратів у різні типи ракових пухлин. «Малі інтерферуючі РНК, які здійснюють процес так званої РНК-інтерференції, мають неймовірний потенціал для лікування раку», пояснює професор Стівен Доуді (Steven Dowdy), який керував дослідженням: «і, хоча нам доведеться ще дуже багато зробити, на даний момент ми розробили технологію доставки препаратів у популяцію клітин – як первинної пухлини, і метастазів, не пошкоджуючи у своїй здорові клітини».

Багато років Доуді та її колеги займалися вивченням протиракового потенціалу малих інтерферуючих РНК. Однак звичайні siRNA – крихітні негативно заряджені молекули, які через їхні властивості вкрай складно доставити до клітини. Щоб досягти цього, вчені використали короткий сигнальний білок PTD (peptide transduction domain). Раніше з його застосуванням було створено понад 50 «гібридних білків», у яких PTD був з'єднаний із білками-супресорами пухлинного росту.

Однак просте з'єднання siRNA з PTD не призводить до доставки РНК у клітину: siRNA заряджені негативно, PTD – позитивно, внаслідок чого утворюється щільний РНК-білковий конгломерат, що не транспортується через клітинну мембрану. Тому дослідники спочатку з'єднали PTD з білковим зв'язуючим РНК доменом, який нейтралізував негативний заряд siRNA (отримавши гібридний білок, названий PTD-DRBD). Такий РНК-білковий комплекс вже легко проходить через клітинну мембрану і потрапляє в цитоплазму клітини, де специфічно інгібує матричні РНК білків, що активують зростання пухлини.

Щоб виявити здатність гібридного білка PTD-DRBD доставляти до клітин siRNA, вчені використовували клітинну лінію, отриману з раку легень людини. Після обробки клітин PTD-DRBD-siRNA було виявлено, що найбільш сприйнятливими до siRNA є клітини пухлини, у той час як у нормальних клітинах (як контроль використовувалися Т-клітини, ендотеліальні клітини та ембріональні стовбурові клітини), де не відбувалося підвищеної продукції онкогенних білків, токсичних ефектів немає.

Даний метод можна піддавати різним модифікаціям, використовуючи різні siRNA для придушення різних пухлинних білків – не тільки що продукуються у зайвій кількості, але й мутантних. Також можна модифікувати терапію у разі рецидивів пухлин, які зазвичай за рахунок нових мутацій стають несприйнятливими до хіміотерапевтичних препаратів.

Онкологічні захворювання дуже варіабельні, а молекулярні характеристики пухлинних клітин білків індивідуальні для кожного пацієнта. Автори роботи вважають, що у цій ситуації застосування малих інтерферуючих РНК – найбільше раціональний підхіддо терапії.

А.М. Дейчман, С.В.Зінов'єв, А.Ю.Барышніков

ЕКСПРЕСІЯ ГЕНІВ І МАЛІ РНК В ОНКОЛОГІЇ

ГУ РОНЦ ім. Н.Н.Блохіна РАМН, Москва

РЕЗЮМЕ

У статті представлена ​​роль малих РНК, що контролюють більшість життєво важливих функцій клітини та організму, та можливий зв'язок їх, зокрема, з онкогенезом та іншими (включаючи гіпотетичні) внутрішньоклітинними механізмами геномної експресії.

Ключові слова: малі РНК, інтерференція РНК (РНКі), двониткова РНК (днРНК), редагування РНК, онкогенез.

A.M. Deichman, С.В.Зіновієв, А.Ю.Барішніков.

THE GENE EXPRESSION AND SMALL RNAS IN ONCOLOGY

N.N. Blokhin Російський Cancer Research Center RAMS, Moscow

ABSTRACT

У paper role of male RNAs supervising the majority vital functions of cell and organism and possible connection them in particular with oncogenesis and others (including hypothetical) intracelular mechanisms of genome expression is submitted.

Key words: Small RNAs, interference RNAs (RNAi), double strand RNAs (dsRNAs), RNA editing, tumorogenesis.

Вступ

Експресія окремих генів і цілих геномів еукаріотів, включаючи процесинг, різні види транскрипції, сплайсингів, перестановок, редагування РНК, рекомбінацій, трансляцію, інтерференцію РНК, регулюється деякими білками (продуктами регуляторних, структурних, гомеозисних генів, транскрипційними низькомолекулярними ефекторами. Серед процесорних РНК – рРНК, тРНК, мРНК, деякі види регуляторних РНК та малі РНК.

На сьогодні відомо, що малі РНК не кодують білок, часто обчислюються сотнями на геном і беруть участь у регуляції експресії різних еукаріотичних генів (соматичних, імунних, гермінативних, стовбурових клітин). Під контролем виявляються процеси диференціювання, (гематопоез, ангіогенез, адіпогенез, міогенез, нейрогенз), морфогенезу (включаючи ембріональні стадії, розвиток/ріст, фізіологічну регуляцію), проліферації, апоптозу, канцерогенезу, мутагенезу, смутеногенезу, імуногенезу ; відмічені випадки метаболічної регуляції (наприклад, глікосфінголіпідів). Більш широкий клас некодуючих РНК в 20-300/500 нуклеотидів та їх РНП виявлені не тільки в ядрі/ядру/цитоплазмі, але і в ДНК-містять клітинних органелах (мітохондріях тварин; у рослин знайдені мікро-РНК і консенсусні до транскриптів хлор РНК).

Для управління та регулювання в.н. процесами важливо: 1. що невеликі за розмірами природні/штучні РНК (малі РНК, тРНК, подібні) та їх комплекси з білками (РНП) здатні до надмембранного клітинного та мітохондріального транспорту; 2. що після розпаду мітохондрій частина їхнього вмісту, РНК і РНП, можуть опинитися в цитоплазмі та ядрі. Перелічені властивості малих РНК (РНП), функціонально значуща роль яких у процесі вивчення лише збільшується, очевидно, мають зв'язок із фактором настороженості щодо раку та інших генетичних захворювань. Одночасно прояснилася висока значущість епігеномних модифікацій хроматину при виникненні пухлин. Ми розглянемо лише дуже обмежену кількість випадків із безлічі подібних.

Малі РНК

Механізм дії малих РНК полягає у здатності їх майже комплементарно зв'язуватися з З-нетрансльованими областями (З-НТО) мРНК-мішеней (які іноді містять ДНК-/РНК-транспозируючі MIR/LINE-2-елементи, а також консервативні Alu-повтори ) і викликати інтерференцію РНК (РНКі = RNAi; зокрема, при антивірусній відповіді). Ускладнення, однак, у тому, що крім клітинних існують і вірус-кодовані малі РНК (герпесу, SV40, ін; EBV, наприклад, містить 23, а KSHV - 12 miRNAs), що взаємодіють з транскриптами і вірусу та господаря. Одних тільки клітинних/вірусних miRNAs відомо більше 5 тисяч у 58 видів. РНК ініціює або деградацію (за участю комплексу RISC, RNA-Induced Silencing Complex) за вразливими для нуклеаз фрагментами безперервних спіралей днРНК (двонитевых РНК мРНК, ін.), або частково оборотне інгібування переривчасто спіралізованих днРНК. Зрілі малі РНК (~15-28 нуклеотидів) утворюються в цитоплазмі зі своїх попередників різної довжини (у десятки і сотні нуклеотидів), що процесують в ядрі. Крім того, малі РНК беруть участь у формуванні сайленсинового структури хроматину, регуляції транскрипції окремих генів, придушенні експресії транспозонів і підтримці функціональної структури протяжних ділянок гетерохроматину.

Розрізняють кілька основних видів малих РНК. Найбільш добре вивчені мікро-РНК (miRNAs) та малі інтерферуючі РНК (siRNAs). Крім того, серед малих РНК вивчаються: активні у гермінативних клітинах piRNAs; малі інтерферуючі РНК, асоційовані з ендогенними ретротранспозонами та повторюваними елементами (при локальній/глобальній гетерохроматизації – починаючи з ранніх стадій ембріогенезу; підтримують рівень теломер), rasiRNAs дрозофії; часто кодуються інтронами білкових генів і функціонально важливі при трансляції, транскрипції, сплайсингу (де-/метилюванні, псевдоуридильуванні нуклеїнових кислот) малі ядерні (snRNAs) та ядерцеві (snoRNAs) РНК; комплементарні ДНК-зв'язуючим NRSE-(Neuron Restrictive Silenser Element)-мотивам малі модуляторні РНК, smRNAs, з маловідомими функціями; трансактивуючі малі інтерферуючі РНК рослин, tasiRNAs; короткі шпилькові РНК, shRNAs, що забезпечують довготривалу РНК (стійкий генний сайленсинг) довгих днРНК-структур при антивірусній відповіді у тварин.

Малі РНК (miRNAs, siRNAs, ін.) взаємодіють з новосинтезованими транскриптами ядра/цитоплазми (регулюючи сплайсинг, трансляцію мРНК; метилювання/псевдоуридилювання рРНК, ін.) і хроматину (при тимчасово-локальній та епігенетично успадкованих гетерохром. Гетерохроматинізація, зокрема, супроводжується де-/метилюванням ДНК, а також метилюванням, ацетилюванням, фосфорилюванням та убіквітінірованіем гістонів (модифікація «гістонового коду»).

Першими серед малих РНК були виявлені та досліджені miRNAs нематоди Caenorhabditis elegans (lin-4), їх властивості та гени, а трохи пізніше – miRNAs рослини Arabidopsis thaliana. В даний час їх пов'язують з багатоклітинними організмами, хоча вони показані у одноклітинної водорості Chlamydomonas reinhardtii, а РНК-подібні шляхи сайленсингу, у зв'язку з противірусним/подібним захистом за участю т.зв. psiRNAs обговорюються для прокаріотів. Геноми багатьох еукаріотів (у тому числі дрозофіли, людини) містять кілька сотень генів miRNAs. Ці стадіо-/тканеспецифічні гени (як і відповідні їм ділянки мРНК-мішеней) часто високогомологічні у філогенетично віддалених видів, але деякі з них - лініоспецифічні. miRNAs містяться в екзонах (білок-кодуючих, РНК-генів), інтронах (найчастіше пре-мРНК), міжгенних спейсерах (включаючи повтори), мають довжину до 70-120 нуклеотидів (і більше) і формують шпилькові структури типу петля/стебло. Для визначення їх генів використовують як біохімічні і генетичні, а й комп'ютерні підходи .

Найбільш характерна довжина «робочої ділянки» зрілих miRNAs – 21-22 нуклеотиди. Можливо, це найчисленніші серед генів, що не кодують білки. Вони можуть розташовуватися у вигляді окремих копій (частіше) або кластерів, що містять безліч подібних або різних генів miRNAs, що транскрибуються (не рідко з автономних промоторів) у вигляді довшого попередника, що процесується в кілька стадій до індивідуальних miRNAs. Припускають, що існує регуляторна miRNA-мережа, що контролює безліч фундаментальних біологічних процесів (включаючи онкогенез/метастазування); ймовірно, не менше 30% експресованих генів людини регулюються miRNAs.

У цьому процесі беруть участь днРНК-специфічні РНКаза-III-подібні ферменти Drosha (ядерна рибонуклеаза; ініціює процесинг інтронних пре-miRNAs після сплайсингу основного транскрипта) і Dicer, що функціонує в цитоплазмі і відповідно розщеплює/деградує ) і утворені пізніше гібридні miRNAs/мРНК структури. Малі РНК, разом з кількома білками (включаючи в.з. РНКази, білки AGO-родини, трансметилази/ацетилази, ін.) та за участю т.зв. RISC- і RITS-подібних комплексів (другий – індукує транскрипційний сайленсинг), здатні, відповідно, викликати РНКі/деградацію та наступний генний сайленсинг на РНК-(до/при трансляції) та ДНК-(при транскрипції гетерохроматину) рівнях.

Кожна miRNA потенційно парується з безліччю мішеней, а кожна мішень – контролюється рядом miRNAs (що нагадує gRNAs-опосередковане редагування пре-мРНК у кінетопластах трипаносом). Аналіз in vitro показав, що miRNAs-регуляція (як і редагування РНК) – ключовий посттранскрипційний модулятор експресії генів. Подібні miRNAs, що конкурують за одну мету – потенційні трансрегулятори РНК-РНК та РНК-білкових взаємодій.

У тварин miRNAs найбільш добре вивчені для нематоди Caenorhabditis Elegans; описано понад 112 генів. Тут виявлені і тисячі ендогенних siRNAs (генів немає; пов'язані, зокрема, зі сперматогенез-опосередкованими транскриптами та транспозонами). Обидві малих багатоклітинних РНК можуть генеруватися РНК-полімеразами, що виявляють активність (не гомологію) RdRP-II (як для більшості інших РНК) і RdRP-III типів . Зрілі малі РНК схожі за складом (включаючи кінцеві 5"-фосфати і З"-ВІН), довжині (зазвичай 21-22 нуклеотиду) і функції, і можуть конкурувати за одну мету. Однак РНК-деградацію, і за повної комплементарності мішені, частіше асоціюють з siRNAs; трансляційну репресію, при частковій, зазвичай, у 5-6 нуклеотидів, комплементарності – з miRNAs; а попередники, відповідно, екзо-/ендогенні (в сотні/тисячі нуклеотидів) для siRNAs, і зазвичай ендогенні (у десятки/сотні нуклеотидів) для miRNAs і біогенез у них різні; втім, у деяких системах ці відмінності є оборотними.

РНКи, опосередкована siRNAs-і miRNAs, має різноманітні природні ролі: від регуляції експресії генів та гетерохроматину – до захисту геному проти транспозонів та вірусів; але siRNAs і частина miRNAs не є консервативними між видами. У рослин (Arabidopsis thaliana) виявлено: siRNAs, що відповідають як генам, так і міжгенним (включаючи спейсери, повтори) областям; величезна кількість потенційних сайтів геному для різних типівмалих РНК. У нематод відкриті також т.зв. мінливі автономно експресовані 21У-РНК (dasRNAs); вони мають 5"-У-монофосфат, складають 21 нукдеотид (20 з них мінливі), і розташовуються між або всередині інтронів білок-кодуючих генів по більш ніж 5700 сайтів двох областей IV хромосоми.

MiRNAs відіграють важливу роль при експресії генів у нормі та патології; у людини – не менше 450-500 таких генів. Зв'язуючись зазвичай із З"-НТО-областями мРНК (ін. мішенями), вони можуть вибірково і кількісно (зокрема, при виведенні з обороту продуктів низькоекспресованих генів), блокувати роботу одних і активність інших генів. Виявилося, що набори профілів експресованих мікро- РНК (і їх мішеней) динамічно змінюються в процесі онтогенезу, диференціювання клітин і тканин, які специфічні, зокрема, при кардіогенезі, процесі оптимізації розмірів довжини дендритів та числа синапсів нервової клітини (за участю miRNA-134, ін. малих РНК). розвитку багатьох патологій (онкогенезі, імунодефіцитах, генетичних захворюваннях, паркінсонізмі, хвороби Альцгеймера, офтальмологічних порушеннях (ретинобластома, ін.), пов'язаних з інфекціями різної природи). .

Комп'ютерний аналіз передбачає сотні мРНК-мішеней для окремих miRNAs та регулювання індивідуальних мРНК безліччю miRNAs. Таким чином miRNAs можуть служити цілям елімінації транскриптів генів-мішеней, або тонкої настройки їх експресії на траскрипційному/трансляційному рівнях. Теоретичний розгляд та експериментальні результати підтверджують існування різноманітних ролей miRNAs.

Більш повний перелік аспектів, пов'язаних з фундаментальною роллю малих РНК у еукаріотів у процесах росту/розвитку та при деяких патологіях (включаючи епігеноміку раку), відображені в огляді.

Малі РНК в Онкології

Процеси росту, розвитку, прогресії та метастазування пухлин супроводжуються безліччю епігенетичних змін, що переростають у більш рідкісні генетичні зміни. Рідкісні мутації, однак, можуть мати велику вагу (для конкретних індивіда, нозології), т.к. щодо окремих генів (наприклад, APC, K-ras, p53) можливий т.зв. ефект «воронки», пов'язаний із майже незворотним розвитком/наслідками онкозахворювань. Пухлиноспецифічна щодо профілю експресії різних генів (білків, РНК, малих РНК) гетерогенність клітин-попередників обумовлюється пов'язаними варіаціями епігеномних структур, що перебудовуються. Епігеном модулюється метилюванням, посттрансляційними модифікаціями/замінами гістонів (на неканонічні), ремоделінгом нуклеосомної структури генів/хроматину (включаючи геномний імпринтинг, тобто дисфункцію експресії алелей батьківських генів та Х-хромосом). Все це і за участю РНКи, регульованої малими РНК, веде до появи дефектних гетерохроматинових (включаючи гіпометильовані центромірні) структур.

Формуванню ген-специфічних мутацій може передувати відоме накопичення сотень тисяч соматичних клональних мутацій у простих повторах або мікросателітах некодуючої (рідко-кодує) області - принаймні в пухлинах з мікросателітним мутаторним фенотипом (MMP); вони становлять значну частину колоректальних, а також раків легенів, шлунка, ендометрію, ін. , ніж у кодуючих (екзони) областях геному мікросателіт-нестабільних, MSI+, пухлин. Хоча природа появи і механізми локалізації MS-стабільних/нестабільних областей до кінця не зрозумілі, формування MS-нестабільності корелювало з частотою мутацій безлічі генів, що раніше не мутують в MSI+-пухлинах, і, ймовірно, каналізувало шляхи їх прогресії; причому частота мутацій MSI-повторів у цих пухлинах збільшувалася більш ніж на два порядки. Не всі гени проаналізовані на наявність повторів, але ступінь мутабільності їх в областях, що кодують/некодують, різна, а точність методів визначення частоти мутацій – відносна. Важливо, що області, що не кодують, за MSI-мутабільними повторами часто біаллельні, а кодуючі – моноаллельні.

Глобальне зниження метилювання в пухлинах характерне для повторів, мобільних елементів (МЕ; їх транскрипція збільшується), промоторів, CpG-сайтів пухлисопресорних miRNA-генів і корелює з гіпертранскрипцією ретротранспозонів у клітинах прогресуючих раків. У нормі коливання «метилома» пов'язані з батьківсько-/стадіо-/тканеспецифічними «хвилями метилювання» та сильним метилюванням центромірних сателітних ділянок гетерохроматину, регульованих малими РНК. При недометилюванні сателітів формована нестабільність хромосом супроводжується посиленням рекомбінації, а порушення метилювання МЕ може запускати їх експресію. Ці фактори сприяють розвитку пухлинного фенотипу. Терапія малими РНК то, можливо високоспецифічної, але має бути контрольованої, т.к. мішенями можуть виявитися не тільки окремі, але й безліч мРНК/РНК молекул, і новосинтезовані РНК різних (включаючи міжгенні повтори, що не кодують) областей хромосом .

Більшість геному людини становлять повтори і МЕ. Ретротранспозон L1 (LINE елемент) містить, як і ендогенні ретровіруси, ревертазу (RTase), ендонуклеазу і потенційно здатний переносити неавтономні (Alu, SVA, ін) ретроелементи; сайленсинг L1/подібних елементів здійснюється в результаті метилювання CpG-сайтів . Зауважимо, що серед CpG-сайтів геному слабо метильовані CpG-острівці промоторів генів, а сам 5-метилцитозин – потенційно мутагенна основа, що дезамінується в тімін (хімічно, або за участю редагування РНК/(ДНК), репарації ДНК); однак деякі з CpG-острівців схильні до надмірного аберантного метилювання, що супроводжується репресією генів-супресорів і розвитку раку. Далі: РНК-зв'язуючий білок, що кодується L1, взаємодіючи з білками AGO2 (родини Argo-naute) і FMRP (fragile mental retardation, білок ефекторного RISC-комплексу), сприяє переміщенню L1-елемента – що вказує на можливу взаєморегуляцію систем РНКи та ретропозиції LINE елементів людини. Важливо, зокрема, що Alu-повтори здатні переміщатися область інтрон/екзонного простору генів .

Ці та подібні механізми можуть посилювати патологічну пластичність геному пухлинної клітини. Пригнічення RTase (кодується, як і ендонуклеазу, елементами L1; RTase також кодується і ендогенними ретровірусами) по механізму РНК супроводжувалося зниженням проліферації і посиленням диференціювання в ряді ракових клітинних ліній. При впровадженні L1 елемента в протоонкоген або супресорний ген спостерігали двониткові розриви ДНК. У тканинах зародкового шляху (мишей/людини) рівень експресії L1 підвищений, а його метилювання залежало від piRNAs-(26-30-п.о.)-зв'язаної системи cайленсингу, де PIWI-білки – варіанти великої родини білків Argo-naute, мутації у яких ведуть до деметилювання/дерепресії L1/подібних елементів з довгими кінцевими повторами. З PIWI-білками ж більшою мірою, ніж з Dicer-1/2 і Ago-білками, пов'язані шляхи сайленсингу rasiRNAs. Посередні piRNAs/siRNAs шляхи сайленсингу реалізуються через внутрішньоядерні тільця, що містять великі еволюційно-консервативні мультибілкові РсG-комплекси, функції яких у пухлинних клітинах часто порушуються. Ці комплекси відповідають за далекодія (через більш ніж 10 т.п.о., між хромосомами) і регулюють кластер генів HOX, відповідальних за план будови тіла.

Нові принципи антисенс-терапії можуть розвиватися з урахуванням знань про більш високоспецифічні (ніж гістонмодифікуючі інгібітори метилювання ДНК/білків) протипухлинних епігеномних агентах, фундаментальних основ епігеномного РНК-сайленсингу та ролі малих РНК у канцеро-генезі.

Мікро-РНК в Онкології

Відомо, що посилення пухлинного росту та метастазування можуть супроводжуватися підвищенням одних та зниженням експресії інших індивідуальних/наборів miRNAs (табл. 1). Деякі їх можуть мати причинну роль онкогенезе; і навіть ті самі miRNAs (як miR-21/-24) у різних пухлинних клітинах можуть виявляти як онкогенні, і супрессирующие властивості. Кожен тип злоякісних пухлин людини добре помітний своїм "miRNA-відбитком", і деякі miRNAs можуть функціонувати як онкогени, пухлинні супресори, ініціатори клітинної міграції, інвазії, метастазування. У патологічно змінених тканинах часто виявляють знижену кількість ключових miRNAs, ймовірно включених до системи протиракового захисту. Які беруть участь в онкогенезі miRNAs (miRs) сформували уявлення про т.зв. «онкомірах»: аналіз експресії понад 200 miRNAs понад 1000 зразків лімфом і солідних раків дозволив успішно класифікувати пухлини на підтипи з їхнього походження та стадії диференціювання. Функції та роль miRNAs успішно вивчають за допомогою: анти-miR-олігонуклеотидів, модифікованих (для збільшення часу життя) за 2"-О-метильними та 2"-О-метоксиетильними групами; а також LNA-олігонуклеотидів, в яких кисневі атоми рибози в положеннях 2" і 4" з'єднані метиленовим мостиком.

(табл. 1)……………….

Таблиця 1 .

miRNAs, експресія яких збільшується () або зменшується ( ↓ ) у деяких найпоширеніших пухлинах у порівнянні з нормальними тканинами (див. , А також ).

Вважається, що регулююча роль експресії, зникнення та ампліфікації miRNA-генів у схильності до ініціації, зростання та прогресії більшості пухлин значна, а мутації в парах miRNA/мРНК-мішень синхронізовані. Профіль експресії miRNAs може використовуватися для класифікації, діагностики та клінічного прогнозу в онкології. Зміни в експресії miRNAs можуть зачіпати клітинний цикл, програму виживання клітини. Мутації miRNAs у стовбурових та соматичних клітинах (як і вибір поліморфних варіантів мРНК-мішеней) можуть сприяти, або навіть відігравати критичну роль при зростанні, прогресії та патофізіології багатьох (якщо не всіх) злоякісних новоутворень. За допомогою miRNAs можлива корекція апоптозу.

Крім індивідуальних miRNAs виявлено їх кластери, що виступають у ролі онкогену, що провокує розвиток, зокрема раку кровотворної тканини у піддослідних мишей; гени miRNAs з онкогенними і супресорними властивостями можуть розташовуватися в одному кластері. Кластерний аналіз профілів експресії miRNAs в пухлинах дозволяє визначити її походження (епітелій, кровотворна тканина, ін.) та класифікувати різні пухлини однієї тканини з неідентичними механізмами трансформації. Оцінку профілю експресії miRNAs можна здійснювати з використанням нано-/мікрочіпів; точність такої класифікації, при відпрацюванні технології (що не просто), виявляється вищою, ніж з використанням профілів мРНК. Деякі з miRNAs беруть участь у диференціації гематопоетичних клітин (миша, людина), ініціації прогресії ракових клітин. Людські miRNA-гени часто розташовуються у т.зв. «ламких» сайтах, областях з переважанням делецій/вставок, точкових розривів, транслокацій, транспозицій, мінімально делетованих та ампліфікованих областей гетерохроматину, залучених до онкогенезу.

Ангіогенез . Роль miRNAs в ангіогенезі, мабуть, значна. Посилення ангіогенезу в деяких Myc-активованих аденокарциномах людини супроводжувалося зміною характеру експресії одних miRNAs, а нокдаун генів інших miRNAs вів до послаблення та пригнічення росту пухлини. Зростання пухлини супроводжувалося мутаціями в K-ras, Myc та TP53 генах, посиленням продукції ангіогенного VEGF-фактору та ступеня Myc-асоційованої васкуляризації; при цьому антиангіогенні фактори Tsp1 і CTGF пригнічувалися miR-17-92 та ін кластер-асоційованими miRNAs. Ангіогенез та васкуляризація пухлини посилювалися (зокрема, в колоноцитах) при коекспресії двох онкогенів більшою мірою, ніж одним.

Нейтралізація антиангіогенного LATS2 фактора, інгібітора циклінзалежної кінази тварин (CDK2; людина/миша), за допомогою miRNAs-372/373 («потенційні онкогени») стимулювала зростання пухлини сім'яників без пошкодження р53-гену.

Потенційними модуляторами ангіогенних властивостей (in-vitro/in-vivo) є miR-221/222, мішені яких, рецептори c-Kit (ін.), - фактори ангіогенезу ендотеліальних венозних HUVEC клітин пуповини, ін. Ці miRNAs і c-Kit взаємодіють в рамках складного циклу, що контролює здатність ендотеліальних клітин до формування нових капілярів.

Хронічний лімфолейкоз (CLL). При В-клітинному хронічному лімфолейкозі (СLL) відзначають знижений рівень експресії генів miR-15a/miR-16-1 (та ін.) в ділянці 13q14 хромосоми людини – сайті найбільш загальних структурних аномалій (включаючи делеції ділянки в 30kb), хоча ген сотні зрілих і пре-miRNAs людини. Обидві потенційно ефективні при терапії пухлин miRNAs містили антисенс-ділянки антиапоптичного білка Bcl2, пригнічували його над-/експресію, стимулювали апоптоз, але майже повністю були відсутні у двох третинах «відбилися» від норми CLL-клітин. Ідентифіковані часті мутації секвенованих miRNAs у стовбурових/соматичних клітинах у 11 із 75 пацієнтів (14.7%) із сімейною схильністю до CLL (спосіб успадкування невідомий), але не у 160 здорових пацієнтів. Ці спостереження викликають припущення про пряме функціонування miRNAs у лейкемогенезі. В даний час не все відомо про зв'язок рівнів експресії генів miRNAs (та їх функцій) та інших генів у нормальних/пухлинних клітинах.

Актуальність. Порушення функції лицевого нерва при виконанні оперативного втручання на привушній слинній залозі є однією з актуальних проблемі визначається як поширеністю захворювання, так і значною частотою