Вижте какво е "малка РНК" в други речници. За всички РНК в света, големи и малки. Функции на малките РНК

Малки РНК с фиби или къси РНК с фиби (shRNA къса РНК с фиби, малка РНК с фиби) вторична структурастегнати щифтове. ShRNA може да се използва за изключване на експресията ... ... Wikipedia

РНК полимераза- от клетка на T. aquaticus в процес на репликация. Някои елементи на ензима стават прозрачни и веригите на РНК и ДНК са по-ясно видими. Магнезиевият йон (жълт) се намира на активното място на ензима. Ензим РНК полимераза, който осъществява ... ... Wikipedia

РНК интерференция- Доставяне на малки РНК с фиби с помощта на лентивирусен вектор и механизма на РНК интерференция в клетки на бозайници РНК интерференция (... Уикипедия

РНК генНекодиращата РНК (ncRNA) са РНК молекули, които не се транслират в протеини. Използваният преди това синоним, малка РНК (smRNA, малка РНК), в момента не се използва, тъй като някои некодиращи РНК могат да бъдат много ... ... Wikipedia

Малка ядрена РНК- (snRNA, snRNA) клас РНК, които се намират в ядрото на еукариотните клетки. Те се транскрибират от РНК полимераза II или РНК полимераза III и участват във важни процеси като сплайсинг (отстраняване на интрони от незряла иРНК), регулиране ... Wikipedia

Малки нуклеоларни РНК- (snoRNA, английски snoRNA) клас малки РНК, участващи в химически модификации (метилиране и псевдоуридилиране) на рибозомни РНК, както и тРНК и малки ядрени РНК. Според класификацията на MeSH малките нуклеоларни РНК се считат за подгрупа ... ... Wikipedia

малка ядрена (ядрена с ниско молекулно тегло) РНК- Обширна група (105 106) малки ядрени РНК (100 300 нуклеотиди), свързани с хетерогенна ядрена РНК, са част от малките рибонуклеопротеинови гранули на ядрото; M.n.RNA са необходим компонент на сплайсинг системата ... ...

малки цитоплазмени РНК- Малки (100-300 нуклеотида) РНК молекули, локализирани в цитоплазмата, подобни на малките ядрени РНК. [Арефиев В.А., Лисовенко Л.А. английски руски Речникгенетични термини 1995 407s.] Теми на генетиката EN scyrpssмалка цитоплазма ... ... Наръчник за технически преводач

малка ядрена РНК клас U- Група от протеиново свързани малки (от 60 до 400 нуклеотиди) РНК молекули, които съставляват значителна част от съдържанието на снаждането и участват в процеса на изрязване на интрони; в 4 от 5 добре проучени типа Usn РНК U1, U2, U4 и U5 с 5 ... ... Наръчник за технически преводач

РНК биомаркери- * РНК биомаркери * РНК биомаркерите са огромен брой човешки транскрипти, които не кодират протеиновия синтез (nsbRNA или npcRNA). В повечето случаи малки (miRNA, snoRNA) и дълги (антисенс РНК, dsRNA и др.) РНК молекули са ... ... Генетика. енциклопедичен речник

Книги

• Купете за 1877 UAH (само Украйна)
• Клинична генетика. Учебник (+CD), Бочков Николай Павлович, Пузирев Валерий Павлович, Смирнихина Светлана Анатолиевна. Всички глави са преработени и допълнени във връзка с развитието на медицинската наука и практика. Главите за мултифакторни заболявания, профилактика, лечение на наследствени заболявания,...

Дължината на siRNA е 21-25 bp; те се образуват от dsRNA. Източникът на такива РНК може да бъде вирусни инфекции, генетични конструкции, въведени в генома, дълги фиби в транскрипти и двупосочна транскрипция на транспонируеми елементи.
dsRNAs се нарязват от RNase Dicer на фрагменти от 21–25 bp. с 3" краища, изпъкнали с 2 нуклеотида, след което една от веригите е част от RISC и насочва разрязването на хомоложни РНК. RISC съдържа siRNA, съответстващи както на плюс-, така и на минус-вериги на dsRNA. siRNA нямат свои собствени гени и представляват фрагменти от по-дълги РНК. siRNAs насочват разрязването на целевата РНК, тъй като те са напълно комплементарни към нея. В растенията, гъбичките и нематодите, РНК-зависимите РНК полимерази участват в потискането на генната експресия, за която siRNA също служат като праймери (семена за синтеза на нова РНК. Получената dsRNA се нарязва с Dicer, образуват се нови siPHK, които са вторични, като по този начин усилват сигнала.

РНК интерференция

През 1998 г. Крейг С. Мело и Андрю Файър публикуваха в Nature, в който се посочва, че двойноверижните РНК (dsRNAs) са в състояние да потискат генната експресия. По-късно се оказа, че активният принцип в този процес е късата едноверижна РНК. Механизмът на потискане на генната експресия от тези РНК се нарича
РНК интерференция и РНК заглушаване. Такъв механизъм е открит във всички големи таксони на еукариоти: гръбначни и безгръбначни, растения и гъби. През 2006 г. за това откритие беше присъдена Нобелова награда.
Потискането на експресията може да се случи на транскрипционно ниво или след транскрипция. Оказа се, че във всички случаи е необходим подобен набор от протеини и къси (21-32 bp) РНК.
siPHK регулират генната активност по два начина. Както беше обсъдено по-горе, те насочват разрязването на целевите РНК. Това явление се нарича "потискане" ( потушаване) в гъби, " посттранслационно заглушаване на гени"в растенията и" РНК интерференция "при животни. siPHKs с дължина 21-23 bp участват в тези процеси. Друг вид ефект, siRNAs, са в състояние да потиснат транскрипцията на гени, съдържащи хомоложни siRNA последователности. Това явление се нарича заглушаване на транскрипционния ген (TGS) и се намира в дрожди, растения и животни. siRNA също насочват метилирането на ДНК, което води до образуването на хетерохроматин и транскрипционна репресия. TGS е най-добре проучен в дрождите S. pombe, където е установено, че siRNAs са вмъкнати в подобен на RISC протеинов комплекс, наречен RITS. В неговия случай, както и в случая на RISC, siRNA взаимодейства с протеин от семейството AGO. Вероятно siRNA е в състояние да насочи този комплекс към ген, който съдържа хомоложен siRNA фрагмент. След това RITS протеините набират метилтрансферази, в резултат на което се образува хетерохроматин в локуса, кодиращ целевия ген на siRNA, и активната генна експресия спира.

Роля в клетъчните процеси

Какво е значението на siRNA в клетката?
siRNA участват в клетъчната защита срещу вируси, трансгенна репресия, регулиране на някои гени и образуване на центромерен хетерохроматин. Важна функция на siRNA е потискането на експресията на мобилни генетични елементи. Такова потискане може да се случи както на транскрипционно ниво, така и след транскрипция.
Геномът на някои от вирусите се състои от ДНК, при някои от тях - от РНК, освен това РНК във вирусите може да бъде както едно-, така и двуверижна. Процесът на разрязване на чуждата (вирусна) иРНК в този случай протича по същия начин, както е описано по-горе, т.е. чрез активиране на RISC ензимния комплекс. Въпреки това, за да бъдат по-ефективни, растенията и насекомите са измислили уникален начин за подобряване на защитния ефект на siRNA. Като се прикрепи към веригата на иРНК, областта на siRNA може, с помощта на ензимния комплекс DICER, първо да завърши втората верига на иРНК и след това да я разреже на различни места, създавайки по този начин разнообразие от "вторични" siRNA. Те от своя страна образуват RISC и пренасят иРНК през всички етапи, обсъдени по-горе, до пълното й унищожаване. Такива "вторични" молекули ще могат специфично да се свързват не само с мястото на вирусната иРНК, към което е била насочена "първичната" молекула, но и с други места, което драстично повишава ефективността на клетъчната защита.

По този начин в растенията и низшите животински организми siPHK са важна връзка в един вид "вътреклетъчен имунитет", който им позволява да разпознават и бързо да унищожават чужда РНК. В случай, че РНК-съдържащ вирус навлезе в клетката, такава защитна система ще предотврати размножаването му. Ако вирусът съдържа ДНК, siRNA системата ще попречи на производството на вирусни протеини (тъй като необходимата за това иРНК ще бъде разпозната и отрязана) и използването на тази стратегия ще забави разпространението му в тялото.

При бозайниците, за разлика от насекомите и растенията, работи и друга защитна система. Когато чужда РНК, чиято дължина е повече от 30 bp, навлезе в "зряла" (диференцирана) клетка на бозайник, клетката започва да синтезира интерферон. Интерферонът, свързвайки се със специфични рецептори на клетъчната повърхност, е в състояние да стимулира цяла група гени в клетката. В резултат на това в клетката се синтезират няколко вида ензими, които инхибират синтеза на протеини и разцепват вирусната РНК. В допълнение, интерферонът може да действа върху съседни, все още неинфектирани клетки, като по този начин блокира възможното разпространение на вируса.

Както можете да видите, и двете системи са в много отношения сходни: имат обща цели "методи" на работа. Дори самите имена "интерферон" и "(РНК) интерференция" идват от общ корен. Но те също имат една много съществена разлика: ако интерферонът при първите признаци на инвазия просто "замразява" работата на клетката, предотвратявайки (за всеки случай) производството на много, включително "невинни" протеини в клетката, тогава siRNA системата е изключително разбираема: всяка siRNA ще разпознае и унищожи само своята специфична иРНК. Заместването само на един нуклеотид в siPHK води до рязко намаляване на ефекта на интерференция . Нито един от известните досега генни блокери не притежава такава изключителна специфичност по отношение на целевия си ген.

Откритието на РНК интерференцията даде нова надежда в борбата срещу СПИН и рака. Възможно е чрез използване на siRNA терапия заедно с традиционната антивирусна терапия да се постигне ефект на потенциране, когато две лечения водят до по-изразен терапевтичен ефект от простата сума на всяко от тях, приложено поотделно.
За да се използва механизмът на интерференция на siRNA в клетките на бозайниците, в клетките трябва да бъдат въведени готови двойноверижни молекули на siRNA. Оптималният размер на такива синтетични siPHK е същите 21–28 нуклеотида. Ако увеличите дължината му, клетките ще отговорят с производството на интерферон и намаляване на протеиновия синтез. Синтетичните siPHK могат да навлязат както в заразени, така и в здрави клетки и намаляването на производството на протеин в незаразени клетки би било крайно нежелателно. От друга страна, ако се опитате да използвате siRNA, по-малка от 21 нуклеотида, специфичността на нейното свързване с желаната иРНК и способността за образуване на RISC комплекс рязко намаляват.

Ако по един или друг начин е възможно да се достави siRNA, която има способността да се свързва с която и да е част от генома на ХИВ (който, както знаете, се състои от РНК), можете да опитате да предотвратите интегрирането му в ДНК на клетка гостоприемник. Освен това учените разработват начини за повлияване на различните етапи на възпроизвеждане на ХИВ във вече заразена клетка. Последният подход няма да осигури излекуване, но може значително да намали скоростта на възпроизвеждане на вируса и да даде шанс на притиснатата в ъгъла имунна система да „почине“ от вирусната атака и да се опита да се справи с остатъците от самата болест. На фигурата тези два етапа на възпроизвеждане на ХИВ в клетката, които, както се надяват учените, могат да бъдат блокирани с помощта на siRNA, са маркирани с червени кръстове (етапи 4-5 - вграждане на вируса в хромозомата и етапи 5-6 - сглобяване на вируса и излизане от клетката).


Към днешна дата обаче всичко по-горе се отнася само за областта на теорията. На практика siRNA терапията среща трудности, които учените все още не са успели да преодолеят. Например, в случай на антивирусна терапия, именно високата специфичност на siRNA може да изиграе жестока шега: както е известно, вирусите имат способността бързо да мутират, т.е. променят състава на своите нуклеотиди. Особено успешен в това е ХИВ, чиято честота на промени е такава, че при човек, заразен с един подтип на вируса, след няколко години може да се изолира напълно различен подтип. В този случай модифицираният ХИВ щам автоматично ще стане нечувствителен към siRNA, избрана в началото на терапията.

Стареене и канцерогенеза

Като всеки епигенетичен фактор, siRNAs влияят на експресията на гени, които ги правят "безшумни". Сега има работи, които описват експерименти за изключване на гени, свързани с тумори. Гените се изключват (нокдаун) с помощта на siRNA. Например, китайски учени са използвали siRNA, за да изключат гена на транскрипционния фактор 4 (TCF4), чиято активност причинява синдром на Pitt-Hopkins (много рядко генетично заболяване, характеризиращо се с умствена изостаналост и епизоди на хипервентилация и апнея) и други психични заболявания. В тази работа изследвахме ролята на TCF4 в стомашните ракови клетки. Ектопичната експресия на TCF4 намалява клетъчния растеж в клетъчните линии на рак на стомаха, а нокаутът на siRNA на гена TCF4 увеличава клетъчната миграция. По този начин може да се заключи, че епигенетичното заглушаване на гена TCF4 играе важна роля в образуването и развитието на тумора.

Според изследване в Департамента по онкология, Алберт Айнщайн Cancer Center, ръководен от Леонард Х. Аугенлихт, siRNA участва в спирането на гена HDAC4, което причинява инхибиране на растежа на рак на дебелото черво, апоптоза и повишена транскрипция на p21. HDAC4 е хистон деацетилаза, която е тъканно специфична, потиска клетъчната диференциация и се регулира надолу по време на процеса на клетъчна диференциация. Работата показва, че HDAC4 е важен регулатор на пролиферацията на клетките на дебелото черво (което е важно в процеса на рак), а той от своя страна се регулира от siRNA.

Катедрата по патология към Медицинския факултет на Нара в Япония проведе изследване върху рака на простатата. Репликативното стареене на клетките е бариера срещу неконтролирано делене и канцерогенеза. Краткоживеещите делящи се клетки (TAC) са част от клетъчната популация на простатата, от която се развива туморът. Японски учени изследваха причините, поради които тези клетки преодоляват стареенето. Простатните клетки в културата бяха трансфектирани с junB siRNA. Тези клетки показват повишено нивоекспресия на p53, p21, p16 и pRb, открити по време на стареене. Клетки в култура, които показват намалени нива на р16, се използват за следващата стъпка. Повтарящата се трансфекция на siRNA в TAC позволява на клетките да избегнат стареене при инактивиране на p16/pRb. В допълнение, заглушаването на junB протоонкогена от junB siRNA причинява клетъчна инвазия. Въз основа на това се стигна до заключението, че junB е елемент за p16 и насърчава клетъчното стареене, предотвратявайки злокачествено заболяване (злокачествено заболяване) на TAC. По този начин junB е регулатор на канцерогенезата на простатата и може да бъде цел за терапевтична интервенция. И неговата активност може да се регулира с помощта на siRNA.

Провеждат се много такива изследвания. В момента siRNA е не само обект, но и инструмент в ръцете на медицински изследовател, биолог, онколог и геронтолог. Изследването на връзката на siPHK с онкологичните заболявания, с експресията на гени, свързани с възрастта, е най-важната задача за науката. Измина много малко време от откриването на siRNA и колко интересни изследвания и публикации, свързани с тях, се появиха. Няма съмнение, че тяхното изследване ще се превърне в една от стъпките на човечеството към победата над рака и стареенето...

), предотвратявайки транслацията на иРНК върху рибозомите в протеина, който кодира. В крайна сметка ефектът от малките интерфериращи РНК е идентичен с този от простото намаляване на генната експресия.

Малките интерфериращи РНК са открити през 1999 г. от групата на Дейвид Балкомб в Обединеното кралство като компонент на системата за заглушаване на гени след транскрипция в растенията (англ. PTGS, заглушаване на ген след транскрипция). Групата публикува откритията си в списание Science.

Двуверижните РНК могат да увеличат генната експресия чрез механизъм, наречен РНК-зависима генна активация. RNAa, малка РНК-индуцирана генна активация). Доказано е, че двойноверижните РНК, комплементарни на промоторите на целевите гени, причиняват активиране на съответните гени. РНК-зависимо активиране при прилагане на синтетични двойноверижни РНК е показано в човешки клетки. Не е известно дали подобна система съществува в клетките на други организми.

С възможността да изключи по същество всеки ген по желание, РНК интерференцията, базирана на малки интерфериращи РНК, генерира огромен интерес към основната и приложна биология. Броят на широкообхватните анализи, базирани на RNAi, за идентифициране на важни гени в биохимичните пътища непрекъснато нараства. Тъй като развитието на болестите също се определя от активността на гените, се очаква, че в някои случаи изключването на ген с малка интерферираща РНК може да има терапевтичен ефект.

Въпреки това, прилагането на РНК интерференция на базата на малки интерфериращи РНК при животни, и по-специално при хора, е изправено пред много трудности. Експериментите показват, че ефективността на малките интерфериращи РНК е различна за различните видове клетки: някои клетки лесно реагират на действието на малки интерфериращи РНК и показват намаляване на генната експресия, докато при други това не се наблюдава, въпреки ефективната трансфекция. Причините за това явление все още са слабо разбрани.

Резултатите от първата фаза на изпитванията на първите две RNAi терапевтични лекарства (предназначени за лечение на макулна дегенерация), публикувани в края на 2005 г., показват, че лекарствата, базирани на малки интерфериращи РНК, се понасят лесно от пациентите и имат приемливи фармакокинетични свойства.

Предварителните клинични изпитвания на малки интерфериращи РНК, насочени към вируса на Ебола, показват, че те могат да бъдат ефективни за профилактика на заболяването след излагане. Това лекарство позволи оцеляването на цялата група експериментални примати, получили смъртоносна доза заирски еболавирус.

Разрушаването на таргетната иРНК може да настъпи и под действието на малка интерферираща РНК (Small interfering RNA, siRNA). РНК интерференцията е едно от новите революционни открития в молекулярната биология, а авторите й през 2002 г. получиха за нея Нобелова награда. Интерфериращите РНК се различават рязко по структура от други видове РНК и са две комплементарни РНК молекули с дължина приблизително 21-28 азотни бази, които са свързани една с друга като нишки в ДНК молекула. В същото време два несдвоени нуклеотида винаги остават по краищата на всяка от siRNA веригите. Въздействието се осъществява по следния начин. Когато siRNA молекулата е вътре в клетката, на първия етап тя се свързва в комплекс с два вътреклетъчни ензима - хеликаза и нуклеаза. Този комплекс беше наречен RISC ( Р NA- азиндуциран силенциране ° Скомплекс; тишина - англ мълчи, мълчи; silencing - мълчание, както се нарича процесът на "изключване" на ген в английската и специалната литература). След това хеликазата се развива и разделя нишките на siRNA и една от веригите (антисенс структура) в комплекс с нуклеазата специфично взаимодейства с комплементарния (стриктно съответстващ на него) сайт на целевата иРНК, което позволява на нуклеазата да го отреже на две части. Отрязаните участъци от иРНК са допълнително изложени на действието на други клетъчни РНК нуклеази, които допълнително ги нарязват на по-малки парчета.

siPHK, открити в растенията и нисшите животински организми (насекоми), са важно звено в един вид "вътреклетъчен имунитет", което прави възможно разпознаването и бързото унищожаване на чужда РНК. В случай, че РНК-съдържащ вирус навлезе в клетката, такава защитна система ще предотврати размножаването му. Ако вирусът съдържа ДНК, siRNA системата ще попречи на производството на вирусни протеини (тъй като необходимата за това иРНК ще бъде разпозната и отрязана) и използването на тази стратегия ще забави разпространението му в тялото. Установено е, че системата siRNA е изключително дискриминираща: всяка siRNA ще разпознае и унищожи само своята специфична иРНК. Заместването само на един нуклеотид в siPHK води до рязко намаляване на ефекта на интерференция. Нито един от известните досега генни блокери не притежава такава изключителна специфичност по отношение на целевия си ген.

В момента този метод се използва главно в научни изследвания за идентифициране на функциите на различни клетъчни протеини. Въпреки това, той потенциално може да се използва и за създаване на лекарства.

Откритието на РНК интерференцията даде нова надежда в борбата срещу СПИН и рака. Възможно е чрез използване на siRNA терапия заедно с конвенционални антивирусни и противоракови терапии да може да се постигне потенциращ ефект, при който двете лечения водят до по-изразен терапевтичен ефект от простата сума на всяко прилагано поотделно.

За да се използва механизмът на siRNA-интерференция в клетките на бозайници за терапевтични цели, в клетките трябва да бъдат въведени готови двуверижни siRNA молекули. Съществуват обаче редица проблеми, които в момента не позволяват това да се направи на практика и още повече да се създадат някакви лекарствени форми. Първо, в кръвта те са засегнати от първия ешелон на защитата на тялото, ензимите - нуклеази, които режат потенциално опасни и необичайни двойни вериги на РНК за нашето тяло. Второ, въпреки името си, малките РНК са все още доста дълги и, най-важното, те носят отрицателен електростатичен заряд, което прави невъзможно пасивното им проникване в клетката. И трето, един от най-важните въпроси е как да накараме siRNA да работи (или да проникне) само в определени ("болни") клетки, без да засяга здравите? И накрая проблемът с размера. Оптималният размер на такива синтетични siPHK е същите 21-28 нуклеотида. Ако увеличите дължината му, клетките ще отговорят с производството на интерферон и намаляване на протеиновия синтез. От друга страна, ако се опитате да използвате siRNA, по-малка от 21 нуклеотида, специфичността на нейното свързване с желаната иРНК и способността за образуване на RISC комплекс рязко намаляват. Трябва да се отбележи, че преодоляването на тези проблеми е критично важно не само за siRNA терапията, но и за генната терапия като цяло.

Вече е постигнат известен напредък в справянето с тях. Например, учените се опитват да направят повече siRNA молекули липофилен, тоест способни да се разтварят в мазнините, които изграждат клетъчната мембрана, и по този начин да улесняват проникването на siRNA в клетката. И за да осигурят спецификата на работа само в определени тъкани, генните инженери включват специални регулаторни региони в своите дизайни, които се активират и започват да четат информацията, съдържаща се в такъв дизайн (и следователно siRNA, ако е включена там), само в определени клетки.тъкани.

Така изследователи от Медицинското училище в Сан Диего към Калифорнийския университет (Калифорнийски университет, Медицинско училище в Сан Диего) са разработили нов ефективна системадоставка на малка интерферираща РНК (siRNA), която потиска производството на определени протеини, в клетките. Тази система трябва да стане основа за технологията за доставка на специфични лекарства към различни видове ракови тумори. „Малките интерфериращи РНК, които осъществяват процеса на така наречената РНК интерференция, имат невероятен потенциал за лечение на рак“, обяснява професор Стивън Дауди, който ръководи изследването: „и въпреки че все още имаме много работа за вършене, в момент, когато разработихме технологията за доставяне на лекарства до популация от клетки - както на първичния тумор, така и на метастазите, без да увреждаме здравите клетки.

В продължение на много години Дауди и колегите му са изучавали противораковия потенциал на малки интерфериращи РНК. Обаче конвенционалните siPHK са малки, отрицателно заредени молекули, които поради техните свойства са изключително трудни за доставяне в клетката. За да постигнат това, учените са използвали късия сигнален протеин PTD (пептиден трансдукционен домейн). Повече от 50 "хибридни протеини" бяха създадени преди с неговата употреба, в които PTD беше комбиниран с протеини, потискащи растежа на тумора.

Въпреки това, простото свързване на siPHK с PTD не води до доставяне на РНК в клетката: siPHK са отрицателно заредени, PTD са положително заредени, което води до образуването на плътен РНК-протеинов конгломерат, който не се транспортира през клетъчната мембрана . Така че изследователите първо свързват PTD с протеинов РНК-свързващ домен, който неутрализира отрицателния заряд на siRNA (което води до слят протеин, наречен PTD-DRBD). Такъв РНК-протеинов комплекс вече лесно преминава през клетъчната мембрана и навлиза в клетъчната цитоплазма, където специфично инхибира информационните РНК протеини, които активират туморния растеж.

За да определят способността на слетия протеин PTD-DRBD да доставя siRNA в клетките, учените са използвали клетъчна линия, получена от човешки рак на белия дроб. След третиране на клетки с PTD-DRBD-siRNA беше установено, че туморните клетки са най-податливи на siRNA, докато при нормалните клетки (Т-клетки, ендотелни клетки и ембрионални стволови клетки бяха използвани като контроли), където нямаше повишена производство на онкогенни протеини, не са наблюдавани токсични ефекти.

Този метод може да бъде подложен на различни модификации, като се използват различни siPHK за потискане на различни туморни протеини, не само свръхпродуцирани, но и мутирали. Също така е възможно да се промени терапията в случай на рецидив на тумори, които обикновено стават резистентни към химиотерапевтичните лекарства поради нови мутации.

Онкологичните заболявания са много разнообразни, а молекулярните характеристики на протеините на туморните клетки са индивидуални за всеки пациент. Авторите на работата смятат, че в тази ситуация най-много се използват малки интерфериращи РНК рационален подходкъм терапията.

А.М. Дейхман, С. В. Зиновиев, А. Ю. Баришников

ГЕННА ЕКСПРЕСИЯ И МАЛКА РНК В ОНКОЛОГИЯТА

ГУ РОНЦ им. N.N.Blokhina RAMS, Москва

РЕЗЮМЕ

Статията представя ролята на малките РНК, които контролират повечето от жизнените функции на клетката и тялото, и тяхната възможна връзка, по-специално, с онкогенезата и други (включително хипотетични) вътреклетъчни механизми на геномна експресия.

Ключови думиКлючови думи: малки РНК, РНК интерференция (RNAi), двойноверижна РНК (lncRNA), редактиране на РНК, онкогенеза.

А.М. Deichman, С.В.Зиновиев, А.Ю.Баришников.

ГЕННАТА ЕКСПРЕСИЯ И МАЛКИТЕ РНК В ОНКОЛОГИЯТА

Н.Н. Руски център за изследване на рака Блохин RAMS, Москваой

РЕЗЮМЕ

В статията е представена ролята на малките РНК, контролиращи по-голямата част от жизнените функции на клетката и организма и възможната им връзка по-специално с онкогенезата и други (включително хипотетични) вътреклетъчни механизми на експресия на генома.

ключови думи: Малки РНК, интерферентни РНК (RNAi), двойноверижни РНК (dsRNA), редактиране на РНК, туморогенеза.

Въведение

Експресията на отделни гени и цели еукариотни геноми, включително обработка, различни видове транскрипция, сплайсинг, пренареждане, редактиране на РНК, рекомбинации, транслация, РНК интерференция, се регулира от някои протеини (продукти на регулаторни, структурни, хомеотични гени, транскрипционни фактори) , мобилни елементи, РНК и ефектори с ниско молекулно тегло. Обработващите РНК включват рРНК, тРНК, иРНК, някои регулаторни РНК и малки РНК.

Към днешна дата е известно, че малките РНК не кодират протеини, често наброяват стотици на геном и участват в регулирането на експресията на различни еукариотни гени (соматични, имунни, зародишни, стволови клетки). Процесите на диференциация (хематопоеза, ангиогенеза, адипогенеза, миогенеза, неврогенеза), морфогенеза (включително ембрионални стадии, развитие/растеж, физиологична регулация), пролиферация, апоптоза, карциногенеза, мутагенеза, имуногенеза, стареене (удължаване на живота), епигенетично заглушаване контрол ; са отбелязани случаи на метаболитна регулация (напр. гликосфинголипиди). По-широк клас от некодиращи РНК от 20-300/500 нуклеотиди и техните RNP бяха открити не само в ядрото/нуклеола/цитоплазмата, но и в ДНК-съдържащи клетъчни органели (митохондрии на животни; в растения, микро-РНК и последователности на малка РНК).

За стопанисването и регулирането на В.Н. процеси е важно: 1. че естествените/изкуствените РНК с малък размер (малки РНК, тРНК и др.) и техните комплекси с протеини (RNP) са способни на трансмембранен клетъчен и митохондриален транспорт; 2. че след колапса на митохондриите част от съдържанието им, РНК и РНП, може да попадне в цитоплазмата и ядрото. Изброените свойства на малките РНК (RNP), чиято функционално значима роля се увеличава само в процеса на изследване, очевидно имат връзка с фактора на бдителността по отношение на рака и други генетични заболявания. В същото време стана ясно голямото значение на епигеномните модификации на хроматина в развитието на тумори. Ще разгледаме само много ограничен брой случаи от много подобни.

Малка РНК

Механизмът на действие на малките РНК е тяхната способност да се свързват почти комплементарно с 3'-нетранслирани региони (3'-UTRs) на целеви иРНК (които понякога съдържат ДНК/РНК транспониращи MIR/LINE-2 елементи, както и запазени Alu повторения ).) и предизвикват РНК интерференция (RNAi=RNAi; особено при антивирусен отговор). Усложнението обаче е, че освен клетъчни има и вирусно кодирани малки РНК (херпес, SV40 и др.; EBV например съдържа 23, а KSHV - 12 miRNA), взаимодействащи с транскриптите на както вирусът, така и гостоприемникът. Повече от 5000 клетъчни/вирусни миРНК са известни само в 58 вида. RNAi инициира или разграждане (с участието на RISC комплекса, РНК-индуциран заглушаващ комплекс) в нуклеазно уязвими фрагменти на непрекъсната спирала lncRNA (двуверижна РНК иРНК и т.н.), или частично обратимо инхибиране на упорито навита lncRNA по време на транслация на mRNA цели. Зрелите малки РНК (~15-28 нуклеотида) се образуват в цитоплазмата от техните предшественици с различна дължина (десетки и стотици нуклеотиди), обработващи се в ядрото. В допълнение, малките РНК участват в образуването на заглушаваща структура на хроматина, регулирането на транскрипцията на отделни гени, потискането на експресията на транспозон и поддържането на функционалната структура на разширени участъци от хетерохроматин.

Има няколко основни типа малки РНК. МикроРНК (miRNA) и малки интерфериращи РНК (siRNA) са най-добре проучени. В допълнение, сред малките РНК се изследват следните: piPHK, активни в клетките на зародишната линия; малки интерфериращи РНК, свързани с ендогенни ретротранспозони и повтарящи се елементи (с локална/глобална хетерохроматизация - започвайки от ранните етапи на ембриогенезата; поддържат нивото на теломерите), Drosophia rasiRNAs; често кодирани от интрони на протеинови гени и функционално важни по време на транслация, транскрипция, сплайсинг (де-/метилиране, псевдоуридилиране нуклеинова киселина) малки ядрени (snRNAs) и нуклеоларни (snoRNAs) RNAs; комплементарни към ДНК-свързващи NRSE-(Neuron Restrictive Silenser Element) мотиви малки модулиращи РНК, smRNA, с малко известни функции; трансактивиращи растителни малки интерфериращи РНК, tasiRNAs; РНК с къси фиби, shRNA, осигуряващи дългосрочни RNAi (постоянно заглушаване на гени) на дълги lncRNA структури в антивирусния отговор при животни.

Малки РНК (miPHK, siPHK и т.н.) взаимодействат с новосинтезирани транскрипти на ядрото/цитоплазмата (регулиране на сплайсинг, транслация на иРНК; рРНК метилиране/псевдоуридилиране и т.н.) и хроматин (с временно локално и епигенетично унаследено хетерохроматинизиране на делящ се соматичен зародиш клетки). Хетерохроматинизацията, по-специално, е придружена от де-/метилиране на ДНК, както и метилиране, ацетилиране, фосфорилиране и убиквитиниране на хистони (модификация на "хистоновия код").

МиРНК на нематода Caenorhabditis elegans (lin-4), техните свойства и гени са първите открити и изследвани сред малки РНК, а малко по-късно и миРНК на растението Arabidopsis thaliana. Понастоящем те са свързани с многоклетъчни организми, въпреки че са показани в едноклетъчното водорасло Chlamydomonas reinhardtii и RNAi-подобни пътища на заглушаване, във връзка с антивирусна / подобна защита, включваща т.нар. psiRNA се обсъждат за прокариоти. Геномите на много еукариоти (включително Drosophila и хора) съдържат няколкостотин miRNAs гени. Тези специфични за стадий/тъкан гени (както и съответните им целеви иРНК региони) често са силно хомоложни във филогенетично отдалечени видове, но някои от тях са специфични за линията. миРНК се съдържат в екзони (кодиращи протеини, РНК гени), интрони (най-често пре-иРНК), интергенни спейсъри (включително повторения), имат дължина до 70-120 нуклеотида (или повече) и образуват бримка/стволови фиби структури. За определяне на техните гени се използват не само биохимични и генетични, но и компютърни подходи.

Най-характерната дължина на "работния участък" на зрелите миРНК е 21-22 нуклеотида. Това са може би най-многобройните от некодиращите протеини гени. Те могат да бъдат подредени като отделни копия (по-често) или клъстери, съдържащи много подобни или различни miRNAs гени, транскрибирани (не рядко от автономни промотори) като по-дълъг предшественик, обработен на няколко етапа до отделни miRNAs. Предполага се, че има регулаторна miRNA мрежа, която контролира много фундаментални биологични процеси (включително онкогенеза/метастази); вероятно най-малко 30% от човешките експресирани гени се регулират от miPHK.

Този процес включва lncRNA-специфични RNase-III-подобни ензими Drosha (ядрена рибонуклеаза; инициира обработката на интронни пре-миРНК след снаждане на основния транскрипт) и Dicer, който функционира в цитоплазмата и разцепва/разгражда, съответно, фиби пре- miRNAs (до зрели miRNAs). ) и по-късно хибридни miRNAs/mRNA структури. Малки РНК, заедно с няколко протеини (включително h.p. РНКази, протеини от семейството на AGO, трансметилази / ацетилази и др.) и с участието на т.нар. RISC- и RITS-подобни комплекси (вторият индуцира транскрипционно заглушаване) са способни, съответно, да индуцират RNAi/разграждане и последващо генно заглушаване на РНК- (преди/по време на транслация) и ДНК- (по време на транскрипция на хетерохроматин) нива.

Всяка миРНК потенциално се сдвоява с множество мишени и всяка мишена се контролира от редица миРНК (подобно на gRNAs-медиирано редактиране преди иРНК в трипанозомни кинетопласти). In vitro анализът показа, че регулирането на miPHK (както и редактирането на РНК) е ключов посттранскрипционен модулатор на генната експресия. Подобни miPHK, конкуриращи се за една и съща цел, са потенциални трансрегулатори на РНК-РНК и РНК-протеинови взаимодействия.

При животни, miRNAs са най-добре проучени за нематода Caenorhabditis Elegans; са описани над 112 гена. Тук също са открити хиляди ендогенни siPHK (няма гени; те са свързани по-специално с медиирани от сперматогенеза транскрипти и транспозони). И двете малки многоклетъчни РНК могат да бъдат генерирани от РНК полимерази, които проявяват активност (не хомология) на типове RdRP-II (както за повечето други РНК) и RdRP-III. Зрелите малки РНК са сходни по състав (включително крайни 5'-фосфати и 3'-OH), дължина (обикновено 21-22 нуклеотида) и функция и могат да се конкурират за една и съща цел. Въпреки това, разграждането на РНК, дори когато целта е напълно комплементарна, е по-често свързано с siPHKs; транслационна репресия, с частична, обикновено 5-6 нуклеотидна, комплементарност с miRNAs; и прекурсорите, съответно, са екзо-/ендогенни (стотици/хиляди нуклеотиди) за siPHK и обикновено ендогенни (десетки/стотици нуклеотиди) за miPHK и тяхната биогенеза е различна; в някои системи обаче тези разлики са обратими.

RNAi, медииран от siRNAs- и miRNAs, има различни естествени роли: от регулиране на генната експресия и хетерохроматин до защита на генома срещу транспозони и вируси; но siPHK и някои miPHK не се запазват между видовете. Растенията (Arabidopsis thaliana) имат: siPHK, съответстващи както на гени, така и на междугенни (включително спейсери, повторения) региони; голям брой потенциални геномни сайтове за различни видовемалки РНК. Нематодите имат и т.нар. променливи автономно експресирани 21U-РНК (dasRNAs); те имат 5"-Y-монофосфат, съставляват 21 нуклеотида (20 от тях са променливи) и са разположени между или вътре в интроните на протеин-кодиращи гени на повече от 5700 места в два региона на хромозома IV.

MiPHK играят важна роля в генната експресия при здраве и болест; човек има поне 450-500 такива гени. Като се свързват обикновено с 3"-UTR регионите на иРНК (други мишени), те могат селективно и количествено (по-специално, когато премахват продуктите на слабо експресирани гени от циркулацията), да блокират работата на някои и активността на други гени. Оказа се, че наборите от профили на експресирани микроРНК (и техните мишени) динамично се променят по време на онтогенезата, диференциацията на клетките и тъканите. Тези промени са специфични, по-специално по време на кардиогенезата, процеса на оптимизиране на размера на дължината на дендритите и броя на синапсите на нервната клетка (с участието на miRNA-134, други малки РНК), развитието на много патологии (онкогенеза, имунодефицити, генетични заболявания, паркинсонизъм, болест на Алцхаймер, офталмологични заболявания (ретинобластом и др.) свързани с инфекции от различно естество) Общият брой на откритите miPHK расте много по-бързо от описанието на тяхната регулаторна роля и връзка със специфични мишени.

Компютърният анализ прогнозира стотици целеви иРНК за отделни миРНК и регулиране на отделните иРНК от множество миРНК. По този начин miPHK могат да служат за целите на елиминиране на транскрипти на целеви гени или фина настройка на тяхната експресия на транскрипционни/транслационни нива. Теоретичните съображения и експерименталните резултати подкрепят съществуването на различни роли за miPHK.

По-пълен списък от аспекти, свързани с фундаменталната роля на малките РНК в еукариотите в процесите на растеж/развитие и в някои патологии (включително епигеномика на рака), е отразен в прегледа.

Малки РНК в онкологията

Процесите на растеж, развитие, прогресия и метастази на тумори са придружени от много епигенетични промени, които се развиват в по-редки устойчиво наследени генетични промени. Редките мутации обаче могат да имат голяма тежест (за конкретен индивид, нозология), т.к. по отношение на отделни гени (например APC, K-ras, p53), т.нар. ефектът на „фунията“, свързан с почти необратимо развитие/последици от онкологични заболявания. Туморно-специфичната по отношение на профила на експресия на различни гени (протеини, РНК, малка РНК) хетерогенността на прогениторните клетки се дължи на конюгирани вариации на пренаредени епигеномни структури. Епигеномът се модулира чрез метилиране, пост-транслационни хистонови модификации/замествания (с неканонични), ремоделиране на нуклеозомната структура на гени/хроматин (включително геномно отпечатване, т.е. дисфункция в експресията на алели на родителски гени и X хромозоми ). Всичко това и с участието на RNAi, регулирани от малки РНК, води до появата на дефектни хетерохроматични (включително хипометилирани центромерни) структури.

Образуването на генно-специфични мутации може да бъде предшествано от известното натрупване на стотици хиляди соматични клонални мутации в прости повторения или микросателити на некодиращата (рядко кодираща) област, поне в тумори с микросателитен мутационен фенотип (MMP) ; те съставляват значителна част от колоректалния рак, както и рак на белия дроб, стомаха, ендометриума и др. Нестабилни моно-/хетеронуклеотидни микросателитни повторения (poly-A6-10, подобни) се откриват многократно по-често в регулаторни не- кодиращи гени, които контролират експресията на гени (интрони, интергенни), отколкото в кодиращите (екзони) области на генома на микросателитно-нестабилни, MSI+, тумори. Въпреки че естеството на външния вид и механизмите за локализиране на MS-стабилни/нестабилни региони не са напълно ясни, образуването на MS-нестабилност корелира с честотата на мутациите на много гени, които не са мутирали по-рано в MSI+ тумори и вероятно са канализирали тяхната прогресия; освен това, скоростта на мутация на MSI повторенията в тези тумори се е увеличила с повече от два порядъка. Не всички гени са анализирани за наличие на повторения, но степента на тяхната мутабилност в кодиращи/некодиращи области е различна и точността на методите за определяне на честотата на мутациите е относителна. Важно е, че некодиращите региони за MSI-променливи повторения често са двуалелни, докато кодиращите региони са моноалелни.

Глобалното намаляване на метилирането в туморите е характерно за повторенията, преносимите елементи (ME; тяхната транскрипция се увеличава), промоторите, CpG местата на туморни супресорни miRNA гени и корелира с хипертранскрипцията на ретротранспозони в напреднали ракови клетки. Обикновено флуктуациите на „метилома“ се свързват с родителски/стадийни/тъканно-специфични „метилиращи вълни“ и силно метилиране на центромерни сателитни области на хетерохроматин, регулирани от малки РНК. Когато сателитите са недостатъчно метилирани, образуваната хромозомна нестабилност е придружена от увеличаване на рекомбинацията и нарушението на ТЕ метилирането може да задейства тяхната експресия. Тези фактори благоприятстват развитието на туморния фенотип. Терапията с малка РНК може да бъде силно специфична, но трябва да се контролира, защото мишени могат да бъдат не само индивидуални, но и много иРНК / РНК молекули и новосинтезирана РНК от различни (включително некодиращи интергенни повторения) региони на хромозоми.

По-голямата част от човешкия геном се състои от повторения и ТЕ. Ретротранспозон L1 (LINE елемент) съдържа, подобно на ендогенните ретровируси, реверсетаза (RTase), ендонуклеаза и е потенциално способен да носи неавтономни (Alu, SVA и др.) ретроелементи; заглушаването на L1/подобни елементи възниква в резултат на метилиране в CpG места. Обърнете внимание, че сред CpG местата на генома, CpG островите на генните промотори са слабо метилирани, а самият 5-метилцитозин е потенциално мутагенна база, която се дезаминира в тимин (химически или с участието на РНК/(ДНК) редактиране, ДНК ремонт); въпреки това, някои от CpG островите са обект на прекомерно аберантно метилиране, придружено от потискане на гена на супресора и развитие на рак. Следващ: РНК-свързващ протеин, кодиран от L1, взаимодействащ с протеини AGO2 (от семейство Argo-naute) и FMRP (крехка умствена изостаналост, ефекторен RISC-комплексен протеин), насърчава движението на елемента L1 - което показва възможна взаимна регулация на системи RNAi и ретропозиции на човешки LINE елементи. Важно е, по-специално, че Alu повторенията могат да се преместят в областта на пространството интрон/екзон на гените.

Тези и подобни механизми могат да подобрят патологичната пластичност на генома на туморната клетка. Потискането на RTase (кодирана, подобно на ендонуклеазата, от L1 елементи; RTase също е кодирана от ендогенни ретровируси) от механизма RNAi беше придружено от намаляване на пролиферацията и увеличаване на диференциацията в редица ракови клетъчни линии. При въвеждане на L1 елемента в протоонкоген или супресорен ген се наблюдават двуверижни разкъсвания на ДНК. В тъканите на зародишната линия (мишки/човек), нивото на експресия на L1 е повишено и неговото метилиране зависи от системата за заглушаване, свързана с piRNAs-(26-30-bp), където PIWI протеините са варианти на голямото семейство на Argo -природни протеини, мутациите в които водят до деметилиране/дерепресия на L1/подобни елементи с дълги крайни повторения. Пътищата на заглушаване на rasiRNAs са свързани с PIWI протеини в по-голяма степен, отколкото с Dicer-1/2 и Ago протеини. Медиираните от piRNAs/siRNAs пътища за заглушаване се реализират чрез интрануклеарни тела, съдържащи големи еволюционно запазени мултипротеинови PcG комплекси, чиито функции често са нарушени в туморните клетки. Тези комплекси са отговорни за действието на дълги разстояния (през повече от 10 kb, между хромозомите) и регулират клъстера от HOX гени, отговорни за плана на тялото.

Могат да бъдат разработени нови принципи на антисенс терапия, като се вземат предвид знанията за по-високо специфични (от хистон-модифициращите инхибитори на ДНК/протеин метилиране) антитуморни епигеномни агенти, основните принципи на заглушаване на епигеномна РНК и ролята на малките РНК в канцерогенезата.

Микро-РНК в онкологията

Известно е, че повишеният туморен растеж и метастазите могат да бъдат придружени от увеличаване на някои и намаляване на експресията на други индивиди/набори от miPHK (Таблица 1). Някои от тях може да имат причинно-следствена роля в онкогенезата; и дори същите miPHK (като miR-21/-24) в различни туморни клетки могат да проявяват както онкогенни, така и супресивни свойства. Всеки тип човешки злокачествени тумори е ясно различим по своя "миРНК-отпечатък", а някои миРНК могат да функционират като онкогени, туморни супресори, инициатори на клетъчна миграция, инвазия, метастази. В патологично променени тъкани често се открива намален брой ключови miPHK, вероятно включени в системите за защита срещу рак. миРНК (miRs), участващи в онкогенезата, са формирали концепцията за т.нар. "oncomirax": анализът на експресията на повече от 200 miPHK от повече от 1000 проби от лимфоми и солидни ракови заболявания направи възможно успешното класифициране на тумори в подтипове според техния произход и етап на диференциация. Функциите и ролята на miPHK се изучават успешно с помощта на: анти-miR олигонуклеотиди, модифицирани (за увеличаване на живота) при 2'-O-метил и 2'-O-метоксиетил групи; както и LNA олигонуклеотиди, в които кислородните атоми на рибозата в позиции 2 "и 4" са свързани с метиленов мост.

(Маса 1)……………….

маса 1 .

miRNAs, чиято експресия се увеличава () или намалява ( ↓ ) при някои от по-често срещаните тумори в сравнение с нормалните тъкани (вижте също ).

Смята се, че регулаторната роля на експресията, изчезването и амплификацията на miRNA гени в предразположението към иницииране, растеж и прогресия на повечето тумори е значителна и мутациите в miRNA/mRNA-целевите двойки са синхронизирани. Експресионният профил на miPHK може да се използва за класификация, диагностика и клинична прогноза в онкологията. Промените в експресията на miRNA могат да повлияят на клетъчния цикъл, програмата за оцеляване на клетката. Мутации на miPHK в стволови и соматични клетки (както и селекция на полиморфни целеви варианти на иРНК) могат да допринесат или дори да играят критична роля в растежа, прогресията и патофизиологията на много (ако не всички) злокачествени заболявания. С помощта на miRNAs е възможна корекция на апоптозата.

В допълнение към индивидуалните миРНК бяха открити техните клъстери, действащи като онкоген, който провокира развитието, по-специално, на рак на хематопоетичната тъкан при опитни мишки; miRNAs гени с онкогенни и супресорни свойства могат да бъдат разположени в един и същи клъстер. Клъстерният анализ на профилите на експресия на miPHKs в тумори прави възможно определянето на неговия произход (епител, хемопоетична тъкан и т.н.) и класифициране на различни тумори на една и съща тъкан с неидентични механизми на трансформация. miRNAs експресионно профилиране може да се извърши с помощта на нано-/микрочипове; точността на такава класификация, когато технологията е разработена (което не е лесно), се оказва по-висока, отколкото при използването на профили на иРНК. Някои от miPHK участват в диференциацията на хематопоетичните клетки (миши, човешки), инициирайки прогресията на раковите клетки. Човешките миРНК гени често се намират в т.нар. „крехки“ места, области с преобладаване на делеции/инсерции, точкови прекъсвания, транслокации, транспозиции, минимално изтриваеми и амплифицирани хетерохроматинови региони, участващи в онкогенезата.

Ангиогенеза . Ролята на miPHK в ангиогенезата вероятно е значителна. Увеличаването на ангиогенезата в някои Myc-активирани човешки аденокарциноми беше придружено от промяна в модела на експресия на някои miPHK, докато генното нокдаун на други miPHK доведе до отслабване и потискане на туморния растеж. Растежът на тумора е придружен от мутации в K-ras, Myc и TP53 гени, повишено производство на ангиогенен VEGF фактор и степента на Myc-свързана васкуларизация; докато антиангиогенните фактори Tsp1 и CTGF бяха потиснати от miR-17-92 и други свързани с клъстера miRNAs. Туморната ангиогенеза и васкуларизацията се засилват (особено в колоноцитите), когато два онкогена са ко-експресирани в по-голяма степен от един.

Неутрализиране на антиангиогенния фактор LATS2, инхибитор на животинска циклин-зависима киназа (CDK2; човек/мишка), с miPHKs-372/373 ("потенциални онкогени") стимулира растежа на тестикуларен тумор, без да уврежда гена p53.

Потенциални модулатори на ангиогенни свойства (in-vitro/in-vivo) са miR-221/222, чиито мишени, c-Kit рецептори (други), са ангиогенезни фактори на ендотелни венозни HUVEC клетки на пъпната връв и др. Тези miPHK и c- Kit взаимодействат като част от сложен цикъл, който контролира способността на ендотелните клетки да образуват нови капиляри.

Хронична лимфоцитна левкемия (ХЛЛ). При В-клетъчна хронична лимфоцитна левкемия (ХЛЛ) се отбелязва намалено ниво на експресия на гените miR-15a/miR-16-1 (и други) в областта 13q14 на човешката хромозома - мястото на най-често срещаните структурни аномалии (включително делеции на 30kb региона), въпреки че геномът експресира стотици зрели и предчовешки miRNAs. И двете миРНК, потенциално ефективни при туморна терапия, съдържат антисенс области на антиапоптотичния Bcl2 протеин, потискат неговата свръхекспресия, стимулират апоптоза, но почти/напълно липсват в две трети от бездомните CLL клетки. Честите мутации на секвенирани миРНК в стволови/соматични клетки са идентифицирани при 11 от 75 пациенти (14,7%) с фамилна предразположеност към ХЛЛ (неизвестен начин на наследяване), но не и при 160 здрави пациенти. Тези наблюдения повдигат предположението за директна функция на miRNAs в левкемогенезата. Понастоящем не всичко се знае за връзката между нивата на експресия на miRNAs ген (и техните функции) и други гени в нормални/туморни клетки.

Уместност. Нарушаването на функцията на лицевия нерв по време на операция на паротидната слюнчена жлеза е един от реални проблемии се определя както от разпространението на заболяването, така и от значимата честота