изсоляване: утаяване със соли на алкални, алкалоземни метали (натриев хлорид, магнезиев сулфат), амониев сулфат; докато не нарушава първична структуракатерица;
валежи: използване на обезводняващи агенти: алкохол или ацетон при ниски температури (около -20°C).
Когато се използват тези методи, протеините губят своята хидратираща обвивка и се утаяват в разтвора.
Денатурация- нарушение на пространствената структура на протеините (първичната структура на молекулата се запазва). Тя може да бъде обратима (структурата на протеина се възстановява след отстраняване на денатуриращия агент) или необратима (пространствената структура на молекулата не се възстановява, например, когато протеините се утаяват с концентрирани минерални киселини, соли на тежки метали).
Методи за разделяне на протеини. Разделяне на протеини от примеси с ниско молекулно тегло
Диализа
Използва се специална полимерна мембрана, която има пори с определен размер. Малките молекули (примеси с ниско молекулно тегло) преминават през порите в мембраната, докато големите молекули (протеините) се задържат. По този начин протеините се измиват от примеси.
Разделяне на протеини по молекулно тегло
Гел хроматография
Хроматографската колона е пълна с гел гранули (Sephadex), който има пори с определен размер. Към колоната се добавя смес от протеини. Протеините, чийто размер е по-малък от размера на порите на Sephadex, се задържат в колоната, тъй като се „забиват“ в порите, а останалите свободно напускат колоната (фиг. 2.1). Размерът на протеина зависи от неговото молекулно тегло.
Ориз. 2.1.Разделяне на протеини чрез гел филтрация
Ултрацентрофугиране
Този метод се основава на различни скорости на утаяване (утаяване) на протеинови молекули в разтвори с различни градиенти на плътност (буфер от захароза или цезиев хлорид) (фиг. 2.2).
Ориз. 2.2.Разделяне на протеини чрез ултрацентрофугиране
електрофореза
Този метод се основава на различни скорости на миграция на протеини и пептиди в електрическо поле в зависимост от заряда.
Като носители за електрофореза могат да служат гелове, целулозен ацетат, агар. Молекулите, които трябва да се разделят, се движат в гела в зависимост от техния размер: тези, които са по-големи, ще бъдат задържани, докато преминават през порите на гела. По-малките молекули ще срещнат по-малко съпротивление и следователно ще се движат по-бързо. В резултат на това след електрофореза по-големите молекули ще бъдат по-близо до началото, отколкото по-малките (фиг. 2.3).
Ориз. 2.3. Разделяне на протеини чрез гел електрофореза
Протеините също могат да бъдат разделени чрез електрофореза по молекулно тегло.За тази употреба електрофореза в PAAG в присъствието на натриев додецил сулфат (SDS-Na).
Изолиране на отделни протеини
Афинитетна хроматография
Методът се основава на способността на протеините да се свързват силно с различни молекули чрез нековалентни връзки. Използва се за изолиране и пречистване на ензими, имуноглобулини, рецепторни протеини.
Молекулите на веществата (лиганди), с които специфично се свързват определени протеини, се свързват ковалентно с частици от инертно вещество. Смес от протеини се добавя към колоната и желаният протеин се свързва здраво с лиганда. Останалите протеини излизат свободно от колоната. След това задържаният протеин може да бъде промит от колоната с буфер, съдържащ свободния лиганд. Този изключително чувствителен метод позволява много малки количества чист протеин да бъдат изолирани от клетъчен екстракт, съдържащ стотици други протеини.
Изоелектрично фокусиране
Методът се основава на различни IEP стойности на протеини. Протеините се разделят чрез електрофореза върху плоча с амфолин (това е вещество, което има предварително образуван рН градиент в диапазона от 3 до 10). По време на електрофореза протеините се разделят според стойността на техния IEP (при IEP зарядът на протеина ще бъде нула и той няма да се движи в електрическото поле).
2D електрофореза
Това е комбинация от изоелектрично фокусиране и електрофореза с SDS-Na. Първо се извършва електрофореза в хоризонтална посока върху плоча с амфолин. Протеините се разделят в зависимост от заряда (CEP). След това плаката се обработва с разтвор на SDS-Na и се извършва електрофореза във вертикална посока. Протеините се класифицират въз основа на молекулното тегло.
Имуноелектрофореза (Western blot)
Аналитичен метод, използван за определяне на специфични протеини в проба (Фигура 2.4).
Изолиране на протеини от биологичен материал.
Разделяне на протеини по молекулно тегло чрез електрофореза в PAAG с SDS-Na.
Прехвърляне на протеини от гела към полимерната плоча, за да се улесни по-нататъшната работа.
Третиране на плочата с неспецифичен протеинов разтвор за запълване на останалите пори.
Така след този етап се получава пластина, чиито пори съдържат отделени протеини, а пространството между тях е запълнено с неспецифичен протеин. Сега трябва да установим дали сред протеините, които търсим, са отговорни за някакъв вид заболяване. За откриване се използва лечение с антитела. Под първични антитела разбирайте антитела към желания протеин. Под вторични антитела се разбират антитела срещу първични антитела. Към състава на вторичните антитела се добавя допълнителен специален етикет (т.нар. молекулярна сонда), за да могат по-късно да се визуализират резултатите. Като етикет се използва радиоактивен фосфат или ензим, плътно свързан с вторичното антитяло. Свързването първо с първични и след това с вторични антитела има две цели: стандартизиране на метода и подобряване на резултатите.
Обработка с разтвор на първични антитела свързването става на мястото на плаката, където има антиген (желания протеин).
Отстраняване на несвързани антитела (промиване).
Третиране с разтвор на белязани вторични антитела за последващо развитие.
Отстраняване на несвързани вторични антитела (промиване).
Ориз. 2.4. Имуноелектрофореза (Western blot)
В случай на наличие на желания протеин в биологичния материал, върху плаката се появява лента, показваща свързването на този протеин със съответните антитела.
заглавка
2
2
Изолирането и пречистването на протеини се извършва на етапи.
1. Хомогенизиране- това е цялостно смилане на обекти на биохимично изследване до хомогенно, т.е. хомогенно състояние, т.е. протеините претърпяват цялостно разпадане до разрушаване на клетъчната стена.
При това те използват:
а)Ножови хомогенизатори тип Warring;
б)хомогенизатори с пестик Potter - Elveheim;
V)топкови и ролкови мелници - за по-плътни предмети;
G)методът на алтернативно замразяване и размразяване, докато разкъсването на клетъчната стена става под действието на ледени кристали;
д)методът на "азотната бомба" - под високо налягане клетките се насищат с азот, след което налягането рязко се освобождава, освобождава се газообразен азот, който сякаш взривява клетката отвътре;
д)Ултразвук, различни пресови методи, смилане на клетъчни стени с ензими. В повечето случаи при хомогенизирането се отделя топлина, докато много протеини могат да бъдат инактивирани, така че всички процедури се извършват в хладилни помещения при t 0 или суровините се охлаждат с лед. В същото време обемът и времето на разрушаване на клетките, както и работното налягане, се контролират внимателно. Идеален хомогенизатор е този, който може да бъде допълнително екстрахиран.
2. Екстракция на протеин, тоест прехвърлянето им в разтворено състояние; най-често екстракцията се извършва едновременно със смилането.
Извличането се извършва:
а)разтваряне в 8-10% солни разтвори;
б)използване на буферни разтвори с рН от киселинно до леко алкално (борат, фосфат, цитрат, трис - буфер: смес от трисаминометан с NH2 - CH3 + HCl;
V)утаяване на протеини с органични разтворители (етанол, метанол, бутанол, ацетон и техните комбинации), докато се разделят протеин-липидните и протеин-протеиновите компоненти, т.е. разрушаването на HSB.
3. Пречистване и фракциониране на протеини.След екстракция сместа се разделя или фракционира на отделни протеини и допълнително се пречиства:
а) изсоляване- това е процесът на утаяване на протеини от неутрални солни разтвори на алкални и алкалоземни метали.
механизъм за изсоляване– добавените аниони и катиони разрушават хидратираната протеинова обвивка на протеините, което е един от факторите за стабилност на протеиновите разтвори. Най-често се използват разтвори на Na и амониеви сулфати. Много протеини се различават по размера на хидратната обвивка и големината на заряда. Всеки протеин има своя зона за изсоляване. След отстраняване на осоляващия агент протеинът запазва своята биологична активност и физикохимични свойства. В клиничната практика методът на изсоляване се използва за разделяне на глобулини (с добавяне на 50% разтвор на амониев сулфат (NH 4) 2SO 4 се образува утайка) и албумини (с добавяне на 100% разтвор на амониев сулфат (NH 4) 2SO 4 образува се утайка).
Осоляването се влияе от:
1) природата и концентрацията на солта;
2) среда с pH;
3) температура.
Основна роля играят валентностите на йоните. Следователно ефектът на солта се оценява чрез йонната сила на разтвора μ:
, тоест йонната сила на разтвора (μ) е равна на произведението на ½ от концентрацията на всеки йон (C) и квадрата на неговата валентност (V).
Методът на Кон е вид осоляване. В същото време се извършва екстракция и утаяване на компонентите. Чрез последователна промяна на температурата (обикновено ниска t o -0 + 8 o C), pH на разтвора и концентрирания етанол, до 18 протеинови фракции се изолират последователно от кръвната плазма.
Метод на Конизползвани във фармацевтичното производство при производството на кръвни заместители;
б) хроматографски методи. Руският учен Михаил Цвет (1903) се счита за основоположник на развитието на хроматографските методи за анализ. В момента има много разновидности от него. Методът се основава на способността на веществата да бъдат специфично адсорбирани върху адсорбент, затворен в колона или поставен върху някакъв носител. Когато това се случи, разделянето на анализираните вещества и тяхното концентриране в строго определен адсорбентен слой. След това през колоната се пропускат подходящи елуенти (разтворители), които отслабват адсорбционните сили и измиват адсорбираните вещества от колоната. Веществата се събират във фракционния колектор.
В основата на хроматографията е коефициент на разпределение, което е равно на отношението на концентрацията на вещество в подвижна фазадо концентрацията на веществото в стационарна фаза(или стационарна фаза).
Стационарна стационарна фаза– може да бъде твърдо или течно или смес от твърдо и течно вещество.
подвижна фаза- течен или газообразен, протича през неподвижното или преминава през него.
В зависимост от вида на неподвижната и подвижната фаза има различни модификации на хроматографския анализ.
Адсорбция- базира се на различната степен на адсорбция на белтъците от адсорбента и тяхната разтворимост в съответния разтворител.
Използваните адсорбенти са силициева киселина, Al 2 O 3 , CaCO 3 , MgO, въглен. Адсорбентът под формата на суспензия с разтворител (обикновено с буферен разтвор) се напълва в колона (стъклена вертикална тръба). Пробата се нанася върху колоната, след което през нея се пропуска разтворител или смес от разтворители.
Разделянето се основава на факта, че веществата с по-високо разпределение на K. (B) движейки се по колоната с по-бърза скорост. Фракциите се събират с помощта на колектор за фракции.
Разпределителна хроматография- въз основа на разпределението на смес от протеини между две течни фази. Разделянето може да се извърши върху специална хроматографска хартия, както и в колони, както при адсорбцията. Твърдата фаза в този случай служи само като опора за течната неподвижна фаза. Хроматографската хартия има свойството да задържа вода между целулозните влакна. Тази вода е стационарна неподвижна фаза. Когато неводен разтворител (подвижна фаза) се движи през хартията под действието на капилярни сили, молекулите на отложеното върху хартията вещество се разпределят между двете фази в съответствие с техния коефициент на разпределение. Колкото по-висока е разтворимостта на веществото в подвижната фаза, толкова по-нататък то ще се движи по хартията заедно с разтворителя.
При разпределителна хроматография върху колона носителите са целулоза, нишесте, силикагел и др., неподвижната фаза е вода. Когато се прилагат към колоната, веществата на сместа се движат по колоната с различна скоросткато се вземе предвид Краспр.
Rf за всяко съединение при стандартни условия е постоянна стойност.
Йонообменна хроматография – основава се на привличането на противоположно заредени частици. За това се използват различни йонообменни смоли: катионообменните смоли съдържат отрицателно заредени групи - сулфонирани стирени и CMC, които привличат положително заредени йони на изследваните вещества. Те се наричат още киселинни йонообменници.
Анионообменните смоли или основните йонообменници съдържат положително заредени групи, които привличат отрицателно заредени протеинови молекули.
Триметиламиностиренът е производно на стирен и целулоза.
В зависимост от q на протеините, които се разделят, се използват подходящи йонообменници, с които определени протеини взаимодействат, а други свободно напускат колоната. Протеините, "утаени" върху колоната, се отстраняват с помощта на по-концентрирани солеви разтвори или чрез промяна на pH на елуента.
Афинитетната хроматография (или афинитетна хроматография) се основава на принципа на селективно взаимодействие на протеини или други макромолекули със специфични вещества, имобилизирани върху носители - лиганди (това може да бъде коензим, ако се изолира ензим, антитяло, антиген и др. Поради висока специфичност на протеини, имобилизираните лиганди са прикрепени към него само един протеин на смес Измит с буферни смеси с променено рН или променена йонна сила.
Достойнство - способността за едноетапно изолиране на дадено вещество висока степенчистота.
Методът на гел филтрация или методът на молекулярно сито е вид проникваща хроматография.
Разделянето на молекулите по размер и форма се основава на свойствата на молекулярното сито, което притежават много порести материали, като органични полимери с триизмерна мрежеста структура, която им придава свойствата на гелове. Гел филтрацията е разделяне на вещества с помощта на гелове въз основа на разликите в размера на молекулите (сефароза, сефадекс, сефакрил, биогелове и др.). Под действието на епихлорохидрина полизахаридните вериги на декстрана (синтезирани от микроорганизми) се омрежват в мрежеста структура, стават неразтворими във вода, но запазват висок афинитет към нея. Поради тази хидрофилност, получените зърна (наречени Sephadex) набъбват силно, за да образуват гел, който се пълни в колоната. Методът се основава на факта, че големите молекули не проникват във вътрешната водна фаза, а по-малките молекули първо проникват в порите на „ситото“, като че ли са заседнали в тях и следователно се движат с по-ниска скорост. Съответно протеините с по-висок Mr влизат първи в приемника. Напоследък порестите стъклени перли все повече се използват като молекулярно сито в пермеационната хроматография.
Електрофоретичният метод в биохимията се основава на разликата в скоростта на движение на молекулите в електрическо поле (аминокиселини, пептиди, протеини, нуклеинови киселини).
Разликата в скоростта зависи от:
1. върху q на молекулата: колкото по-голяма е подвижността на молекулите, толкова по-голямо е общото q. Стойността на q зависи от pH;
2. върху размера на молекулите: колкото по-големи са молекулите, толкова по-малка е тяхната подвижност. Това се дължи на увеличаването на силите на триене и електростатичните взаимодействия на големите молекули с заобикаляща среда;
3. върху формата на молекулите: молекули с еднакъв размер, но различни форми, например фибрили и протеинови глобули имат различни скорости. Това се дължи на разликите в силите на триене и електростатично взаимодействие.
Видове електрофореза
а) Изоелектрично фокусиране. Разделянето става на вертикална колона в град. както рН, така и напрежение. С помощта на специални носители на амфолити градушката се установява в колоната. pH от 0 до 14. В колоната се поставя смес от вещества и се свързва електрически ток. Всеки от компонентите се придвижва до тази част на колоната, където стойността на рН съответства на неговата изоелектрична точка и спира там, тоест се фокусира.
Предимство: разделя, пречиства и идентифицира протеини в една стъпка. Методът е с висока резолюция (0,02 pI).
б) Изотахофорезата е електрофореза върху поддържаща среда. След включване на електрическия ток йоните с най-висока подвижност се придвижват към съответния електрод първи, с най-ниската - последните, които имат междинна подвижност - са разположени в средата.
в) Дискова електрофореза - апаратът се състои от два съда с буфер - горен и долен, свързани с вертикални тръби, съдържащи гел с различни пори. Тъй като йонизираните частици се движат под действието на електрически ток. По-високата порьозност е в горната част на гела.
г) Имуноелектрофореза - метод, съчетаващ електрофореза с имунодифузия (за откриване на антигени в сложни физиологични смеси). Смес от антигени и смес от антитела се поставят перпендикулярно едно на друго върху специален носител. При включване на електрическия ток те се разделят на отделни субстанции и дифундират върху гелоносителя. В точката на среща на антигена със съответното антитяло възниква специфична реакция на утаяване под формата на дъга. Броят на образуваните дъги съответства на броя на антигените.
Методи за определяне на Mr протеини
Голям брой протеини химичен състави аминокиселинната последователност не е установена (1010–1012 протеини), следователно Mr. За това се използват различни методи.
а) Метод на утаяване - определянето на Mr се извършва в специални центрофуги (първата центрофуга е предложена от шведския биохимик Svedberg), при които е възможно да се създаде центробежно ускорение, което е повече от 200 хиляди или повече пъти ускорението на земното притегляне. Mr се определя от V седиментация на молекулите. Докато молекулите се движат от центъра към периферията, се образува рязка граница протеин-разтворител. Скоростта на утаяване се изразява чрез константата на утаяване (S):
където V е скоростта на движение на границата протеин-разтворител (cm/s);
– ъглова скоростротор (rad/s);
е разстоянието от центъра на ротора до средата на клетката с протеиновия разтвор (cm).
Стойността на седиментационната константа S, която е равна на 110–13 C, условно се приема за 1 и се нарича 1 Svedberg (S). S за протеини варира от 1-50 S, понякога до 100 S.
Mr на протеини се определя от уравнението на Svedberg:
където R е универсалната газова константа;
T е абсолютната температура в Келвин;
S е константата на утаяване;
D е коефициентът на дифузия;
е плътността на разтворителя;
V е частичният специфичен обем газ.
Този метод е скъп поради използването на оборудване.
По-просто и по-евтино:
б) Гел филтрация в тънък слой сефадекс.
Дължината на пътя на протеина (в mm) е логаритмична на Mr.
X - Mr на желания протеин на графиката за калибриране.
в) Дискова електрофореза в полиакриламиден слой - също има връзка между логаритъма Mr на калибровъчните протеини и тяхната дължина на пътя.
Методи за определяне на хомогенността на протеините
Степента на чистота на изолирания протеин се определя от:
- ултрацентрофугиране;
- метод на дискова електрофореза;
- различни имунохимични методи;
- определянето на разтворимостта на протеин (методът на Нортроп) се основава на фазовото правило, според което разтворимостта на чисто вещество при дадени експериментални условия зависи само от температурата, но не зависи от концентрацията на веществото в твърдата фаза.
Ако протеинът е хомогенен, тогава се получава едно огъване на графиката (a), ако има протеинови примеси (b, c), тогава ще получим няколко огъвания на кривата на насищане. Всички протеини имат свои индивидуални криви на разтворимост.
Разглеждани въпроси:Методи за изолиране на органели и мембрани от тъкани, клетки.
Етапи на субклетъчно фракциониране: екстракция,
хомогенизиране и центрофугиране, техните характеристики.
Методи за разделяне и пречистване на субклетъчни компоненти.
Изолиране на мембранни частици.
Идентифициране на мембранни фракции, критерии за тяхното пречистване.
Мониторинг на наличието на примеси с помощта на светлина и
електронна микроскопия, липиден анализ или
определяне на активността на маркерните ензими.
Определяне на протеиновия състав в изолирана мембрана
дроби. Определяне на активността на маркерните ензими
определен тип изолирана мембранна фракция. Получаването на отделни клетъчни компоненти дава възможност за изучаване
техните биохимични и функционални характеристики. Например, можете да създадете
безклетъчна система за рибозоми, които ще синтезират протеин
според информационната РНК, дадена от експериментатора. Посветен
митохондриите при избрани условия могат да извършват синтеза на АТФ, на
изолиран хроматин с участието на подходящи ензими може
Случва се синтез на РНК и т.н.
Напоследък за пресъздаване се използват безклетъчни системи
клетъчни надмолекулни структури. И така, използвайки пречистени от
жълтъчни гранули екстракти от цитоплазмата на яйца на земноводни или морски яйца
таралежи, можете да получите ядра с ядрена обвивка от въведеното в това
безклетъчна система от чужда ДНК (например ДНК на бактериофаг).
Такава ДНК се свързва с гастоновите протеини, които са в изобилие
такъв екстракт се образува хроматин (дезоксирибонуклеопротеин),
който е покрит с двойна мембранна обвивка, носеща дори
ядрени пори. Такива моделни системи помагат да се изучават фини,
интимни процеси, като например транспортирането на макромолекули от цитоплазмата към
ядро и обратно. В цитоплазмени екстракти от яйца на земноводни и
При бодлокожите такива ядра могат периодично да се делят чрез митоза. Тези
моделите имат огромен принос за дешифрирането на природата на регулирането
клетъчен цикъл. За изолиране на клетъчни органели
пробната проба се раздробява и
след това се хомогенизира в буферирана среда с
като се използва хомогенизатор на Potter-Elwedge
(Тефлоново пестило, въртящо се в чаша
цилиндър). Това е сравнително лек метод, който
особено полезен за изолиране на лабилни
молекули и ултраструктури. Други техники за унищожаване
клетки включва ензимен лизис, който разрушава
клетъчни стени или механично разрушаване
замразени тъкани (чрез смилане или използване
въртящи се ножове; под голям натиск;
осмотичен шок; многократно редуване
замразяване и размразяване). За изолирането на непокътнати органели е важно средата, в която
се извършва хомогенизиране, беше изотонично, т.е.
осмотичното налягане на буфера трябва да съответства на налягането
вътре в клетката. Ако разтворът е хипотоничен, органелите ще
"попиват" допълнителна вода и се пръсват, и в
в хипертоничните разтвори, напротив, те се свиват.
Хомогенизирането е последвано от филтриране за отстраняване
непокътнати клетки и съединителни тъкани. Всъщност
фракционирането на клетъчните органели се извършва с помощта на
диференциално центрофугиране, т.е. центрофугиране
при различни скорости на ротора. В същото време стъпалата
увеличаване на центробежната сила (което обикновено се изразява
кратно на нормалното ускорение свободно паданеж
= 9,81 m/s2) води до последователно отлагане на различни
органели, т.е. разделяйки ги според плътността и
размер. Един от основните методи за изолиране на клетъчни структури е
диференциално (сепариращо) центрофугиране. Неговият принцип
приложения в това, че времето на утаяване на частиците в хомогената зависи от техните
размер и плътност: колкото по-голяма е частицата или колкото по-тежка е, толкова по-бързо
ще потъне на дъното на тръбата. За да ускорите процеса на установяване, варирайте
ускорение, генерирано от центрофугата.
При центрофугиране първо ще се утаят ядрата и то при ниски ускорения
и неразрушени клетки, при 15-30 хиляди g големи частици ще се утаят,
макрозоми, състоящи се от митохондрии, малки пластиди, пероксизоми,
лизозоми и др., при 50 хиляди g, микрозоми, фрагменти от вакуола
клетъчни системи.
С многократно фракционно центрофугиране на тези смесени субфракции
могат да се получат чисти фракции. Така че, при отделяне на макрозомата
подфракциите получават отделно митохондрии, лизозоми, пероксизоми. При
отделяне на микрозоми, възможно е да се получи част от мембраните на апарата на Голджи,
фрагменти от плазмената мембрана, вакуоли, гранулиран ретикулум. IN
случаи на по-фино разделяне на фракции се използва центрофугиране
градиент на плътност на захароза, който позволява добро разделяне на компонентите,
дори леко се различават един от друг в специфичното тегло. Изолирането на клетъчните органели обикновено се извършва при ниско ниво
температури (0-5°C), за да се намали степента
разграждане на материала поради катализирани реакции
ензими; последните се освобождават в процеса на унищожаване
тъкани. Добавянето на тиоли и хелатиращи агенти е необходимо за
защита на функционалните SH-групи от окисляване.
Преди изолираните фракции да се анализират биохимично
методи, е необходимо да ги проверите за чистота с помощта
електронен микроскоп.
Получаването на отделни клетъчни компоненти го прави възможно
изучават техните биохимични и функционални характеристики. Така че е възможно
създаде безклетъчна система за рибозоми, която ще
синтезира протеин, както е посочено от експериментатора
информационна РНК. Изолираните митохондрии в съвпадение
условия могат да извършат синтеза на АТФ върху избрания хроматин
с участието на съответните ензими може да възникне
синтез на РНК и др. Основи на метода на центрофугиране
Частиците в разтвора се утаяват (утаяване),
когато тяхната плътност е по-висока от плътността на разтвора, или
плуват (плуват), когато плътността им е по-ниска
плътност на разтвора. Колкото по-голяма е разликата в
плътност, толкова по-бързо е разпределението на частиците.
Когато плътностите на частиците и разтвора са еднакви
(изопикнични условия), частиците остават
неподвижен. С малка разлика в плътността
частиците могат да се отделят само в центрофуга,
което създава центробежна сила, много пъти
по-голяма от силата на гравитацията. връзката между плътността и седиментационния фактор за
различни частици в разтвор на цезиев хлорид (CsCI). Скоростта на утаяване на частиците (ν) зависи от ъгъла
скорост (ω), ефективен радиус на ротора reff (разстояние от
ос на въртене) и седиментационни свойства на частиците.
Седиментационни свойства на частица
се характеризират с коефициента на утаяване S и
се изразяват в единици Svedberg (1S = 10-13s).
Стойността на S може да варира в широки граници. За
сравнение на коефициентите на утаяване в различни среди
те обикновено се коригират за плътността и вискозитета на водата при
20oC (S20w).
Коефициентът на утаяване зависи от молекулното тегло
(M) частици, техните форми (коефициент на триене f),
частичен специфичен обем ΰ (реципрочната стойност на
плътност на частиците).
Центрофугиране с градиент на плътност
Макромолекули или органели, които леко варират по размер или плътност
могат да бъдат разделени чрез центрофугиране в градиент на плътност. За целта две
метод.
При зонално центрофугиране пробата за анализ (напр. протеини или клетки)
наслоени на тънък слой върху буферния разтвор. По време на центрофугиране на частици
преминават през разтвора, защото тяхната плътност е по-висока от плътността на разтвора. Скорост на пътуване
зависи от масата и формата на частиците (вижте формулите на схема А). Спрете центрофугирането
преди частиците да достигнат дъното на центрофужната епруветка. След това дъното се пробива и
съберете няколко фракции, съдържащи различни частици. Стабилност на градиента на плътност в
процесът на центрофугиране се постига чрез използване на разтвори на въглехидрати или колоидни
силикагел, чиято концентрация нараства от повърхността към дъното на епруветката. градиент на плътност
предотвратява образуването на конвекционни течения, които намаляват качеството на разделяне.
При изопикнично центрофугиране пробата (напр. ДНК, РНК или вируси) е еднаква
разпределен в целия обем на разтвора (обикновено CsCI). В този случай делбата продължава
много по-дълго отколкото при зоналното центрофугиране. Градиентът на плътност се създава в
процес на центрофугиране поради утаяване и дифузия. С течение на времето всяка частица
попада в областта, съответстваща на собствената му плаваща плътност. центрофугиране
спрете, когато се установи равновесие. Получените фракции се анализират с помощта на
подходяща техника за измерване. маркерни молекули
В процеса на фракциониране е важно
контролират чистотата на фракциите. присъствие
в определена фракция на един или друг
органели и наличието на други компоненти
определени с помощта на маркерни молекули.
Те обикновено са специфични за органелите
ензими (маркерни ензими).
Разпределение на маркерните ензими в клетката
отразява локализацията
съответните каталитични реакции. Функции и състав на биомембраните
Най-важните мембрани в животинските клетки
са плазмената мембрана, вътрешната и
външна ядрена мембрана, мембрана
ендоплазмен ретикулум и апарат на Голджи
, вътрешни и външни митохондриални
мембрани. Лизозоми, пероксизоми, различни
везикулите също са отделени от цитоплазмата чрез мембрани
. Растителните клетки съдържат допълнителни мембрани
хлоропласти, левкопласти и вакуоли. всичко
мембраните са полярни, т.е. има разлика в
композиции на вътрешни и външни по отношение на
слоеве цитоплазма. Биомембраните и техните компоненти изпълняват следните функции:
1. Ограничаване и изолиране на клетки и органели. Отделяне на клетките от извънклетъчните
среда се осигурява от плазмената мембрана, която предпазва клетките от
механични и химични въздействия. Плазмената мембрана осигурява
също поддържане на разликата в концентрациите на метаболити и неорганични йони между тях
вътреклетъчна и външна среда.
2. Контролиран транспорт на метаболити и йони определя вътрешната среда, която
от съществено значение за хомеостазата, т.е. поддържане на постоянна концентрация на метаболити и
неорганични йони и други физиологични параметри. регулируеми и
селективен транспорт на метаболити и неорганични йони през порите и
чрез носители става възможно поради изолирането на клетките и
органели чрез мембранни системи.
3. Възприемане на извънклетъчни сигнали и тяхното предаване в клетката, както и инициация
сигнали.
4. Ензимна катализа. В мембраните на границата между липидната и водната фаза
локализирани ензими. Именно тук реакциите с неполярни
субстрати. Примери за това са биосинтезата на липидите и метаболизма на неполярните
ксенобиотици. Най-важните енергийни реакции са локализирани в мембраните.
метаболизъм, като окислително фосфорилиране (дихателна верига) и фотосинтеза.
5. Контактно взаимодействие с междуклетъчния матрикс и взаимодействие с др
клетки по време на клетъчно сливане и образуване на тъкан.
6. Закрепване на цитоскелета за поддържане на формата на клетките и органелите
и клетъчна подвижност. След хомогенизиране на пробата следва центрофугиране на хомогената с
отделни фракции, съдържащи
клетъчни ядра, митохондрии и други органели, както и
супернатант, съдържащ разтворим
клетъчни цитозолни протеини.
Екстракция на свързани с мембраната протеини и разграждане
олигомерни протеини в протомери
Ако желаният протеин е силно свързан с някакви структури
клетки, той трябва да бъде прехвърлен в разтвор.
За прекъсване на хидрофобните взаимодействия между протеините
и мембранни липиди, към разтвора се добавят детергенти:
просто използвайте тритон Х-100 или натриев додецил сулфат.
Под действието на детергенти, хидрофобни
взаимодействия между протомерите в олигомерни протеини Отстраняване на непротеинови вещества от разтвора
Нуклеинови киселини, липиди и др
непротеиновите вещества могат да бъдат отстранени от разтвора с помощта на техните специални физикохимични вещества
Имоти. И така, липидите са лесни
се премахват
от
решение
добавяне
органични
разтворители
Например
ацетон. Въпреки това, въздействието трябва да бъде
краткосрочен. защото ацетонът причинява
денатурация на някои протеини. Нуклеинова
киселини се утаяват чрез добавяне към разтвора
стрептомицин. Изолирането на мембранните липиди се извършва веднага след получаване на мембраната
фракция, която трябва да бъде защитена от действието на протео- и липолитиците
ензими, автоокисляване.
Обикновено всички процедури се извършват при ниска температура, като се поддържа определена
стойности на рН и йонна сила. За извличане на липиди, смес от хлороформ-
метанол. За едновременното извличане на протеини и липиди от сенките на еритроцитите, техните
екстрахира се със смес от бутанол-вода. В същото време повечето от протеините се превръщат в
вода и липид в бутанолния слой.
Извършва се количествен анализ на сложни смеси от фосфолипиди
хроматографски методи. За подготвителни цели те се използват главно
колонна хроматография. За микроаналитични изследвания успешно
за разделяне се използва тънкослойна хроматография
почти всички класове липиди, локализирайте ги и ги идентифицирайте, когато
с помощта на специални реактиви.
Разтворителите се класират според тяхната елуираща способност.
възходящ ред петролев етер, циклохексан, въглероден тетрахлорид,
толуен, бензен, хлороформ, диетилов етер, етилацетат, ацетон, n-пропанол,
етанол, метанол, вода. След преминаване през разтворителите плочата се изсушава за
въздух и идентифицирайте липидите чрез оцветяване със специфични
реактиви. За количествено определяне на отделените фосфолипиди
тънкослойна хроматография, използвайки спектрофотометрични методи. Мембранните изследвания са до голяма степен
мерки се основават на две осн
методически похвати: това е разглобяване
нативна (т.е. естествена) мембрана
неговите съставни елементи и последващи
пълно или частично сглобяване на изкуствени
мембрани, използващи всички или
части от оригиналните компоненти на мембраната.
Приложени към мембраните, тези техники
наречено "разтваряне" и
"реконструкция". За разтваряне е по-добре да използвате детергенти с
нисък CMC, тъй като такива перилни препарати са по-леки
вградени в мембраната и го предизвикват по-бързо
разпадане до смесени мицели. В това си качество
най-ефективните йонни почистващи препарати.
Като параметри, характеризиращи способността
детергенти до мицелизиране, обикновено
използвайте критична концентрация
мицелизация (CMC) и число на агрегация. ККМ -
е концентрацията, при която започва действието на детергента
образуват мицели. Преди това е във водата
в мономерна форма в истинско състояние
решение. Агрегационният номер показва колко
молекули детергент на мицел. Има четири основни най-често използвани метода за отстраняване.
детергент: диализа, гел филтрация, високо разреждане
солюбилизатор и адсорбция на детергенти върху хидрофобни полимери.
По-бърз начин се основава на премахване на перилния препарат с
гел филтрация, когато солюбилизатът преминава през инерт
гел, чийто размер на порите е достатъчно голям за задържане
детергентни молекули, но малки в сравнение с получените
мембранни частици, които преминават свободно между
гел гранули.
С максимална пълнота почистващият препарат може да бъде отстранен от мембраната
чрез адсорбцията му върху хидрофобни полимери. Насам
особено добър за премахване на остатъци от перилен препарат
вече образувани мембранни частици. Въпреки това, за да премахнете
детергент от първоначалния солюбилизатор, той е малко полезен, тъй като
ранни етапи на реконструкция, отстраняване на почистващ препарат може
да бъде придружено от адсорбцията на значителни количества протеини и липиди
върху полимера. Следователно този метод обикновено се използва в комбинация с
с други средства в крайния етап на отстраняване на препарата.
висок капацитет за съхранение, което гарантира техния активен биологичен принцип.
ЛИТЕРАТУРА
1. Кличкова Г.Ю. Разработване на технология за комплексен препарат от хрущялната тъкан на калмари, сьомга и есетра // Материали на Всерос. Интернет конф. млади учени. - Владивосток: TIN-RO-Център, 2004. - С. 164-170.
2. Мецлер Д. Биохимия. Т. 2. - М., 1980. - 605 с.
3. Суховърхова Г.Ю. Биохимични характеристики на хрущялната тъкан на хидробионтите и технологията на хранителните добавки към храната: Дис. ... канд. техн. науки. - Владивосток, 2006. - 157 с.
4. Ситова М.В. Научно обосноваване на комплексната обработка на амурска есетрова риба: Резюме на дисертацията. дис. ... канд. техн. науки
М.: ВНИРО, 2005. - 24 с.
Катедра по хранителни биотехнологии
Постъпила на 07.02.07г
ИДЕНТИФИКАЦИЯ НА ПРОТЕИНОВИ КОМПОНЕНТИ НА КЕРАТИН ЕНЗИМАТИЧЕН ХИДРОЛИЗАТ
Ч.Ю. ШАМХАНОВ, Л.В. АНТИПОВА
Държавен петролен институт в Грозни, Воронежска държавна технологична академия
Един от най ефективни начинипреработката на вторични ресурси на месопреработвателната промишленост и птицепреработвателната промишленост е използването на съвременни биотехнологични методи за получаване на хранителни хидролизати. Функционалните и технологичните свойства на получените продукти зависят от биохимичния състав и молекулното тегло на белтъчните му компоненти.
Използвайки физични и химични методиза определяне на молекулното тегло на протеините резултатът зависи не само от масата, но и от електрически заряди формата на протеиновата молекула, особено при промяна на скоростта на протеинова дифузия, скоростта на утаяване в гравитационно поле. Поради тази причина при определяне молекулни теглапротеини, за предпочитане е да се използват статистически методи, когато протеиновият разтвор е в състояние на равновесие, например при преминаването му през колона, пълна с гел.
Целта на работата е да се определи молекулното тегло М на протеиновите компоненти на кератиновия ензимен хидролизат и неговия биохимичен състав.
Методът на гел филтрация беше използван за определяне на молекулното тегло на протеиновите компоненти на кератиновия хидролизат. Сефадекс v-100 (среден, диаметър на частиците 40-120 цт) се използва с граници на фракциониране от 4000-150000 Da.
Колона 46.0 х 1.9 cm се напълва със сефадекс, третиран с 0.02 М универсален буфер, рН 7.0. Върху него се нанася 1,5 cm3 разтвор на -7 mg/cm3 - кератинов хидролизат и се елуира със същия универсален буфер със скорост 12 cm3/h. Събират се фракции от 3 cm3 и след това съдържанието на протеин в тях се определя спектрофотометрично върху SF-46 при 280 nm. За да се определи молекулното тегло на фракциите на кератиновия хидролизат, колоната със Sephadex беше предварително калибрирана при същите условия, като се използват няколко чисти (маркерни) протеини с известна М. Калибрационната крива беше изградена с помощта на линейна връзка между ^ М и обема
елуат Ye, освободен от колоната. В табл. 1 показва някои от физикохимичните характеристики на маркерните протеини.
маса 1
Маркерен протеин М, Да 1§ m V, cm3
Лизозим 13930 4,143 54
Трипсин 25700 4,409 48
Пероксидаза 34000 4,531 45
Говежди албумин 68000 4,832 36
Син декстран 2000000 6,301 21
Водоразтворима фракция
керопептид<10000 2,845 72
Водоразтворимата фракция на кератиновия хидролизат напуска колоната в много по-малък обем от маркерния протеин лизозим с най-ниско молекулно тегло. Следователно в кератиновия хидролизат (керопептид) няма протеинови фракции с М > 13930 Da. Приблизителната маса на хидролизните продукти е под 10 000 Da, определена чрез гел филтрация върху маркерни протеини Sephadex B-100. Линейна зависимостмежду ^ М протеини и обема на елуата Ye, освободен от колоната, е показано на фиг. 1 (1 - син декстран; 2 - говежди албумин; 3 - пероксидаза; 4 - трипсин; 5 - лизозим; 6 - водоразтворима фракция на керопептид).
Поради липсата на маркерни протеини в изследвания диапазон от 10000-5000 Da, търсенето на водоразтворимата протеинова фракция е извършено с помощта на порести
таблица 2
M, Да Разтворим протеин и пептиди, mg/cm3 Общо пептиди и аминокиселини, µg/cm3 Тирозин, µmol/cm3 Редуциращи вещества, µg/cm3
0-10000 5,64 7337 7,835 2815
0-5000 4,21 5278 5,960 2272
% от изходното ниво 74,6 71,9 76,1 80,7
мембрани от степени UPM-100 и UAM-50 на лабораторна ултрафилтрационна единица (CJSC NPO Tekhkon). Схемата включваше самата инсталация с 5% разтвор на керопептид, поставен върху магнитна бъркалка за постоянното му смесване. За ефективно отделяне на протеиновия разтвор в горната част на апарата се подава сгъстен въздух под налягане.Хидролизните продукти преминават през порести мембрани, редуващи се в зависимост от желаното молекулно тегло на ултрафилтрата, към долната част на апарата и събрани в приемен съд. В получените ултрафилтрати са определени редица биохимични параметри, които позволяват да се оцени разпределението на хидролизните продукти по молекулно тегло (Таблица 2).
Керопептидът съдържа нискомолекулни протеини с М 5000-10000 Da. Тяхната масова част се изчислява като разликата в показанията за фракции 0-10000 и 0-5000 Da и е 1,43 mg/cm3. Тази фракция също дава положителна реакция към реакцията на нинхидрин (2059 µg/cm3), тирозин (1,875 µmol/cm3) и редуциращи вещества (543 µg/cm3). Но основният дял от хидролизните продукти е концентриран в нискомолекулната фракция с М< 5000 Да, соответствующей по существующей классификации фракции пептидов. Массовая доля всех исследуемых показателей составляет более 7 0% от аналогичных значений во фракции 0-10000 Да.
По-нататъшното определяне на молекулното тегло на водоразтворимите протеинови фракции на керопептида се извършва на Sephadex B-25 (среден, диаметър на частиците 50-150 μm), което позволява да се настрои в рамките на диапазона на фракциониране от 1000-5000 Da. Условията на гел филтрация остават непроменени. от
Резултатите от определянето на протеина във фракциите бяха използвани за конструиране на профил на елуиране. Във всички фракции, освен протеин, се определя съдържанието на нискомолекулни вещества по нинхидринов метод, тирозин и редуциращи вещества (RS), както и количественото разпределение на протеиновите фракции. На фиг. Фигура 2 показва гел хроматограма на ензимен кератинов хидролизат чрез Sephadex B-25 (крива 1 - протеин; 2 - нинхидринов тест; 3 - тирозин; 4 - PB).
В този случай протеинът се открива под формата на два малки пика почти в първите фракции. Масова част на протеина във фракции № 1-8 от 3-24 cm3
има доста високи стойности и възлиза на 0,12-0,18 mg / cm3 (крива 1).
По-голямата част от продукта излиза от колоната като максимален протеинов пик с обем от 27 cm3 елуат (фракция № 9, 3 cm3 елуат всяка). Масовата част на протеина в тази фракция е регистрирана на ниво 0,66 mg/cm3, което е 3-4 пъти по-високо, отколкото в другите изследвани фракции.
По-нататъшното елуиране на керопептида в обемен диапазон от 36-96 cm3 разкрива три пика с намаляване на масовата част на протеина в тях с не повече от 0,08 mg / cm3. Пълният разтвор на керопептид се елуира в краен обем от 96 cm3.
Във фракция № 9 е установено цялото количество налични РС, масови фракции 66 μg/cm3 (крива 4). Реакцията на нинхидрин се използва в гел хроматография за идентифициране на разпределението на хидролизните продукти по молекулно тегло. Установено е, че когато излишно количество нинхидрин и протеинови продукти взаимодействат със свободна MH2 група и в зависимост от броя на тези групи е възможно да се локализира протеинът
RV, μg/cm3 175 co D 5 o l s; .7 0
100 125 X - 3 co o o. 0,5
80 § 100 2 _ n 0.4
60 1 isin, 7 sl 0,3
40 1 l 5 o - (P 2 o I- 0,2
20 25 _ 2 ai O 0,1
6 12 18 24 30 36 42 48 54 60 66 72 78 84 90 96 V, cm
производни чрез елуиране през Sephadex. По този начин ниската масова фракция на нинхидрин (4–6 µg/cm3) много точно отразява количеството на свободните аминогрупи и определя наличието на високомолекулни пептиди с М 3000–5000 Da във фракции J# 1–8 (крива 2) . Известно е, че в обхвата на измерване на молекулното тегло на продуктите на хидролизата< 5000 Да входят только пептиды и аминокислоты. При больших концентрациях белка (фракция № 9) соответственно увеличивается окрашивание его свободных аминогрупп нингидрином -64 мкг/см3. Этот диапазон элюции характеризует наличие во фракциях № 8-12 среднемолекулярных пептидов с М 300-3000 Да. Определяемый с помощью маркерных белков по калибровочной кривой lg M керопептида 2,845 также указывает на его ориентировочную массу >700 Да. Допълнителен анализ на профила на елуиране за пробата нинхидрин (фракции № 12-36) разкрива пик, който не съответства на концентрацията на протеин, както се наблюдава за пептиди в предишни фракции. Масовата фракция на веществата с ниско молекулно тегло във фракция № 23 е 157 µg/cm3, което е повече от 2 пъти по-високо от това на пептидите във фракция № 9. наличието на продукти на хидролиза под формата на свободни аминокиселини в последна фракция. Принадлежността към него и на аминокиселината тирозин (0,06 µmol/cm3) е още едно доказателство за заявената позиция.
По този начин, гел филтриране на кератинов хидролизат през Sephadex G-100 и G-25 показва наличието на разтворено вещество с ниско молекулно тегло в него.
моят протеин (< 10000 Да), составляющего 25% от его общего количества в гидролизате. Преобладающая часть белковых продуктов - 75% - представлена среднемолекулярными пептидами (300-3000 Да) с ориентировочной М >700 Да. В този случай протеиновите вериги съдържат 5-20 аминокиселинни остатъка. Важно е да се подчертае, че фракция № 9 едновременно дава реакции на биуретовата връзка, нинхидрин, тирозин и RV. Тази характеристика предполага наличието на въглехидрати в кератиновия протеин и тяхната пряка връзка с протеина като част от един комплекс.
ЛИТЕРАТУРА
1. Антипова Л.В., Пащенко Л.П., Шамханов Ч.Ю., Курилова Е.С. Получаване и характеризиране на хранителен кератинов хидролизат // Съхранение и преработка на селскостопански суровини. - 2003. - № 7.
2. Антипова Л.В., Шамханов Ч.Ю., Осминин О.С., Пожалова Н.А. Биохимични характеристики на процеса на ензимна хидролиза на кератин-съдържащи суровини в птицепреработвателната промишленост Изв. университети. Хранителна технология. - 2003. - № 5-6.
3. Антипова Л.В., Шамханов Ч.Ю., Осминин О.С. Ко -
подобряване на технологията за производство на керопептид от пухени суровини // Месна промишленост. - 2004. - № 3. - С. 44-47.
4. Рогов И.А., Антипова Л.В., Дунченко Н.И., Жеребцов Н.А. Химия на храната. В 2 книги. Книга. 1. Белтъци: структура, функции, роля в храненето. - М.: Колос, 2000. - 384 с.
5. Остерман Л.А. Протеинова хроматография и нуклеинова киселина. - М.: Наука, 1985. - 536 с.
6. Кочетов Г.А. Практическо ръководство по ензимология. - 2-ро изд., преработено. и допълнителни - М.: Висше. училище, 1980. - 272 с.
Катедра Технология на храните Катедра Технология на месото и месните продукти
Получено 0S.02.0? Ж.
ТЕОРЕТИЧНО ОБОСНОВАВАНЕ НА МЕХАНИЗМА НА КОНСЕРВИРАЩОТО ДЕЙСТВИЕ НА КОМПОНЕНТИТЕ НА ЕКСТРАКТИТЕ ОТ ПУШЕНЕ
С.В. ЗОЛОТОКОПОВА, И.А. ПАЛАГИНА
Държава Астрахан Технически университетАстрахански клон на Саратовския държавен социално-икономически университет
Важна област на изследване последните годиние да изследва ефекта на различни хранителни добавки не само върху вкуса и аромата, но и върху увеличаването на срока на годност на хранителните продукти. От древни времена за консервиране са се използвали пикантни растения, готварска сол, опушване и пр. Анализът показва, че в момента димните екстракти завладяват пазара. Пушените храни са особено популярни сред населението, а традиционното пушене губи позициите си пред бездимното.
Екологични и перспективни са екстрактите, получени при щадящи условия.
G.I. работи върху подобряването на технологията за извличане от десетилетия. Касянов - Почетен деец на науката и технологиите на Руската федерация, Почетен изобретател на Руската федерация, доктор на техническите науки, професор, ръководител на катедрата по технология на месни и рибни продукти на държавата Кубан технологичен университет. С проблемите на увеличаването на ефективност на обработката на различни суровини, които позволяват да се подобри качеството на продуктите, да се намали времето за обработка и в същото време да се намалят разходите за енергия.
Протеините се идентифицират с помощта на различни системи за търсене в базите данни EMBL и Sequest, разработени в рамките на изследователските екипи. Търсачката Mascot обаче се превърна в стандарт за идентифициране на протеини. Като почти всички търсачки, тя използва уеб интерфейс и самата търсачка е достъпна в Интернет, но може да бъде закупена и инсталирана на компютъра на потребителя.
Mascot може да работи с различни протеинови и геномни бази данни. Това могат да бъдат обширни публични бази данни, като NCBI или SwissProt, търговски, както и такива, създадени от самия потребител.
Във всички системи идентификацията се извършва според масспектрометричните данни, получени от изследователя, чрез сравняването им с известни протеинови структури.
Като се има предвид, че през последните десетилетия секвенирането на протеини по същество се свежда до секвениране на гените, които ги кодират, на практика е по-разумно да се идентифицират протеини чрез сравняване на експериментални масспектрометрични данни с известни геноми.
Съществуват различни алгоритми за идентифициране на протеини, но техните възможности са ограничени от известните към момента геноми. Въпреки че, като се има предвид, че организмите различни видовеВъпреки това, тъй като те имат хомоложни протеини, често е възможно да се идентифицират протеини от организми с неизвестен геном.
Различните методологични подходи към протеомните изследвания дават фундаментално Различни видоведанни и изискват собствени изчислителни подходи при обработката.
Най-достъпният и високоефективен метод е идентифицирането чрез масспектрометрични пептидни карти на специфична протеолитична хидролиза. В англоезичната литература е известен като Peptide Mass Fingerprint (PMF).Трипсинът се използва най-често като специфична протеаза. На първия етап изолираният протеин (например чрез електрофореза) се подлага на протеолитична хидролиза. В резултат на такава хидролиза се получава смес от пептиди. Като се има предвид, че се използва високо специфична протеаза, това ще бъде смес от добре дефинирани пептиди. Така че, когато се използва трипсин, протеинът ще бъде "отрязан" от аргинин и лизин.
Следващият етап е регистриране на масовия спектър на получената смес. Резултатът е набор или списък от молекулни тегла. Той не дава информация за структурата или други свойства на продуктите, методът се основава само на предположението, че това са молекулните тегла на пептидите и тези пептиди са се образували в резултат на специфична хидролиза. Тук се крие основната идея на подхода - ако всеки протеин има свой собствен набор от пептиди и съответен списък с молекулни тегла, тогава е напълно възможно да се реши обратната задача - да се намери съответният протеин за получения списък на молекулните тегла. И такъв проблем наистина често е възможен за разрешаване.
По-специално, това ви позволява да направите талисман.
