Вижте какво е "Small RNA" в други речници. За всички РНК в света, големи и малки Функции на малки РНК

РНК с малки фиби или РНК с къси фиби (shRNA къса фиби РНК, малка фиби РНК) вторична структурастегнати щифтове. ShRNA може да се използва за изключване на експресията ... ... Wikipedia

РНК полимераза- от клетка на T. aquaticus в процес на репликация. Някои елементи на ензима са направени прозрачни и веригите на РНК и ДНК са по-ясно видими. Магнезиевият йон (жълт) се намира на активното място на ензима. РНК полимеразата е ензим, който осъществява ... ... Уикипедия

РНК интерференция- Доставка на малки фиби РНК с помощта на лентивирусен вектор и механизма на РНК интерференция в клетките на бозайници РНК интерференция (а ... Wikipedia

РНК генНекодиращите РНК (ncRNA) са РНК молекули, които не се транслират в протеини. Използваният по-рано синоним, малка РНК (smRNA, малка РНК), в момента не се използва, тъй като някои некодиращи РНК могат да бъдат много ... ... Wikipedia

Малка ядрена РНК- (snRNA, snRNA) клас от РНК, които се намират в ядрото на еукариотните клетки. Те се транскрибират от РНК полимераза II или РНК полимераза III и участват във важни процеси като сплайсинг (отстраняване на интрони от незряла иРНК), регулиране ... Wikipedia

Малки нуклеоларни РНК- (snoRNA, английски snoRNA) клас малки РНК, участващи в химичните модификации (метилиране и псевдоуридилиране) на рибозомни РНК, както и tRNA и малки ядрени РНК. Според класификацията MeSH малките нуклеоларни РНК се считат за подгрупа ... ... Уикипедия

малка ядрена (ядрена с ниско молекулно тегло) РНК- Обширна група (105 106) малки ядрени РНК (100 300 нуклеотида), свързани с хетерогенна ядрена РНК, са част от малките рибонуклеопротеинови гранули на ядрото; M.n.RNA са необходим компонент на системата за сплайсинг ... ...

малки цитоплазмени РНК- Малки (100-300 нуклеотида) РНК молекули, локализирани в цитоплазмата, подобно на малката ядрена РНК. [Арефиев В.А., Лисовенко Л.А. Английско руски тълковен речник на генетичните термини 1995 407 г.] Теми генетика EN scyrpssmall cytoplasmic ... ... Наръчник за технически преводач

малка ядрена РНК клас U- Група от свързани с протеини малки (от 60 до 400 нуклеотида) РНК молекули, които съставляват значителна част от съдържанието на снаждането и участват в процеса на изрязване на интрони; в 4 от 5 добре проучени типа Usn РНК U1, U2, U4 и U5 по 5 ... ... Наръчник за технически преводач

РНК биомаркери- * РНК биомаркери * РНК биомаркери са огромен брой човешки транскрипти, които не кодират протеиновия синтез (nsbRNA или npcRNA). В повечето случаи малки (miRNA, snoRNA) и дълги (антисенс РНК, dsRNA и др.) РНК молекули са ... ... Генетика. енциклопедичен речник

Книги

• Купете за 1877 UAH (само за Украйна)
• Клинична генетика. Учебник (+CD), Бочков Николай Павлович, Пузирев Валерий Павлович, Смирнихина Светлана Анатолиевна. Всички глави са преработени и допълнени във връзка с развитието на медицинската наука и практика. Главите за многофакторни заболявания, профилактика, лечение на наследствени заболявания,...

Дължината на siRNA е 21-25 bp; те се образуват от dsRNA. Източникът на такава РНК могат да бъдат вирусни инфекции, генетични конструкции, въведени в генома, дълги фиби в транскриптите и двупосочна транскрипция на транспозируеми елементи.
dsRNAs се нарязват от RNase Dicer на 21-25 bp фрагменти. с 3" краища, изпъкнали от 2 нуклеотида, след което една от веригите е част от RISC и насочва разрязването на хомоложни РНК. RISC съдържа siRNA, съответстващи както на плюс-, така и на минус-вериги на dsRNA. siRNAs нямат свои собствени гени и представляват фрагменти от по-дълги РНК. siRNAs насочват изрязването на целевата РНК, тъй като са напълно комплементарни към нея. При растенията, гъбите и нематодите РНК-зависимите РНК полимерази участват в потискането на генната експресия, за което също и siRNAs служат като праймери (семена за синтеза на нова РНК Получената dsRNA се нарязва с Dicer, образуват се нови siRNAs, които са вторични, като по този начин се усилва сигнала.

РНК интерференция

През 1998 г. Крейг С. Мело и Андрю Файър публикуваха в Nature, в които се посочва, че двуверижните РНК (dsRNAs) са в състояние да потиснат генната експресия. По-късно се оказа, че активният принцип в този процес е късата едноверижна РНК. Механизмът на потискане на генната експресия от тези РНК се нарича
РНК интерференция и РНК заглушаване. Такъв механизъм е открит във всички големи таксони на еукариоти: гръбначни и безгръбначни, растения и гъби. През 2006 г. беше присъдена Нобелова награда за това откритие.
Потискането на експресията може да се случи на ниво транскрипция или след транскрипция. Оказа се, че във всички случаи е необходим подобен набор от протеини и къси (21-32 bp) РНК.
siRNAs регулират генната активност по два начина. Както беше обсъдено по-горе, те насочват разрязването на целеви РНК. Това явление се нарича "потискане" ( потискане) в гъби, " пост-транслационно генно заглушаване"в растенията и" РНК интерференция " при животни. siRNAs с дължина 21-23 bp са включени в тези процеси. Друг вид ефект - siRNAs са в състояние да потискат транскрипцията на гени, съдържащи хомоложни siRNA последователности. Това явление се нарича заглушаване на транскрипционния ген (TGS) и се намира в дрожди, растения и животни. siRNAs също насочват ДНК метилиране, което води до образуването на хетерохроматин и транскрипционна репресия. TGS е най-добре проучен в дрождите S. pombe, където е установено, че siRNAs се вмъкват в RISC-подобен протеинов комплекс, наречен RITS. В неговия случай, както и в случая на RISC, siRNA взаимодейства с протеин от семейството AGO. Вероятно siRNA е в състояние да насочи този комплекс към ген, който съдържа хомоложен siRNA фрагмент. След това RITS протеините набират метилтрансферази, в резултат на което се образува хетерохроматин в локуса, кодиращ гена мишена siRNA, и активната генна експресия спира.

Роля в клетъчните процеси

Какво е значението на siRNA в клетката?
siRNAs участват в клетъчната защита срещу вируси, трансгенна репресия, регулиране на някои гени и образуване на центромерен хетерохроматин. Важна функция на siRNA е потискането на експресията на мобилни генетични елементи. Такова потискане може да се случи както на транскрипционно ниво, така и след транскрипционно.
Геномът на някои от вирусите се състои от ДНК, в някои от тях - от РНК, освен това РНК във вирусите може да бъде както едноверижна, така и двуверижна. Процесът на разрязване на чуждата (вирусна) иРНК в този случай протича по същия начин, както е описано по-горе, т.е. чрез активиране на RISC ензимния комплекс. Въпреки това, за да бъдат по-ефективни, растенията и насекомите са измислили уникален начин за засилване на защитния ефект на siRNA. Като се присъедини към веригата на иРНК, регионът на siRNA може, с помощта на ензимния комплекс DICER, първо да завърши втората верига на иРНК и след това да я разреже на различни места, като по този начин създава разнообразие от "вторични" siRNA. Те от своя страна образуват RISC и пренасят иРНК през всички етапи, обсъдени по-горе, до пълното й унищожаване. Такива "вторични" молекули ще могат специфично да се свързват не само с мястото на вирусната иРНК, към което е насочена "първичната" молекула, но също и към други места, което драстично повишава ефективността на клетъчната защита.

Така в растенията и по-нисшите животински организми siRNAs са важна връзка в един вид "вътреклетъчен имунитет", който им позволява да разпознават и бързо унищожават чуждата РНК. В случай, че вирус, съдържащ РНК, влезе в клетката, такава защитна система ще предотврати размножаването й. Ако вирусът съдържа ДНК, системата siRNA ще попречи на производството му на вирусни протеини (тъй като необходимата за това иРНК ще бъде разпозната и отрязана) и използването на тази стратегия ще забави разпространението му в тялото.

При бозайниците, за разлика от насекомите и растенията, действа и друга защитна система. Когато чужда РНК, чиято дължина е повече от 30 bp, навлезе в "зряла" (диференцирана) клетка на бозайник, клетката започва да синтезира интерферон. Интерферонът, свързващ се със специфични рецептори на клетъчната повърхност, е в състояние да стимулира цяла група гени в клетката. В резултат на това в клетката се синтезират няколко вида ензими, които инхибират синтеза на протеини и разцепват вирусната РНК. В допълнение, интерферонът може да действа върху съседни, все още неинфектирани клетки, като по този начин блокира възможното разпространение на вируса.

Както можете да видите, и двете системи са сходни в много отношения: имат обща цели "методи" на работа. Дори самите имена "интерферон" и "(РНК) интерференция" идват от общ корен. Но те имат и една много съществена разлика: ако интерферонът при първите признаци на инвазия просто "замрази" работата на клетката, предотвратявайки (за всеки случай) производството на много, включително "невинни" протеини в клетката, тогава системата siRNA е изключително разбираема: всяка siRNA ще разпознае и унищожи само своята собствена специфична иРНК. Заместването само на един нуклеотид в siRNA води до рязко намаляване на ефекта на интерференцията . Нито един от известните досега генни блокери няма такава изключителна специфичност по отношение на своя целеви ген.

Откриването на РНК интерференцията даде нова надежда в борбата срещу СПИН и рак. Възможно е чрез използване на siRNA терапия заедно с традиционната антивирусна терапия да се постигне потенциращ ефект, когато два ефекта водят до по-изразен терапевтичен ефект от простата сума на всеки от тях, приложен поотделно.
За да се използва механизмът на сиРНК интерференция в клетките на бозайници, готови двуверижни siRNA молекули трябва да бъдат въведени в клетките. Оптималният размер на такива синтетични siRNA е същите 21-28 нуклеотида. Ако увеличите дължината му, клетките ще реагират с производството на интерферон и намаляване на протеиновия синтез. Синтетичните siRNA могат да влязат както в заразени, така и в здрави клетки и намаляването на производството на протеин в неинфектирани клетки би било крайно нежелателно. От друга страна, ако се опитате да използвате siRNA, по-малка от 21 нуклеотида, специфичността на нейното свързване с желаната иРНК и способността за образуване на RISC комплекс са рязко намалени.

Ако по един или друг начин е възможно да се достави siRNA, която има способността да се свързва с която и да е част от генома на ХИВ (която, както знаете, се състои от РНК), можете да опитате да предотвратите интегрирането й в ДНК на клетка гостоприемник. Освен това учените разработват начини за въздействие върху различните етапи на репродукцията на ХИВ в вече заразена клетка. Последният подход няма да осигури лечение, но може значително да намали скоростта на репродукция на вируса и да даде на притиснатата в ъгъла имунна система шанс да „почине“ от вирусната атака и да се опита да се справи с остатъците от самата болест. На фигурата тези два етапа на репродукция на ХИВ в клетката, които, както се надяват учените, могат да бъдат блокирани с помощта на siRNA, са маркирани с червени кръстове (етапи 4-5 - вграждане на вируса в хромозомата и етапи 5-6 - сглобяване на вируса и излизане от клетката).


Към днешна дата обаче всичко изброено по-горе се отнася само за областта на теорията. На практика, siRNA терапията среща трудности, които учените все още не са успели да заобиколят. Например, в случай на антивирусна терапия, високата специфичност на siRNA може да изиграе жестока шега: както е известно, вирусите имат способността бързо да мутират, т.е. променят състава на техните нуклеотиди. В това особено успешен е ХИВ, чиято честота на промените е такава, че при човек, заразен с един подтип на вируса, след няколко години може да се изолира напълно различен подтип. В този случай модифицираният щам на HIV автоматично ще стане нечувствителен към siRNA, избрана в началото на терапията.

Стареене и канцерогенеза

Както всеки епигенетичен фактор, siRNAs влияят върху експресията на гени, които ги правят „мълчаливи“. Сега има произведения, които описват експерименти за изключване на гени, свързани с тумори. Гените се изключват (нокдаун) с помощта на siRNA. Например, китайски учени, използващи siRNA, изключиха гена на транскрипционния фактор 4 (TCF4), чиято активност причинява синдром на Пит-Хопкинс (много рядко генетично заболяване, характеризиращо се с умствена изостаналост и епизоди на хипервентилация и апнея) и други психични заболявания. В тази работа ние изследвахме ролята на TCF4 в раковите клетки на стомаха. Ектопичната експресия на TCF4 намалява клетъчния растеж в клетъчните линии на рак на стомаха, а нокаутът на siRNA на TCF4 гена увеличава клетъчната миграция. По този начин може да се заключи, че епигенетичното заглушаване на гена TCF4 играе важна роля в образуването и развитието на тумора.

Според изследване в отдела по онкология, Център за рак на Алберт Айнщайн, ръководен от Леонард Х. Аугенлихт, siRNA участва в изключване на гена HDAC4, което причинява инхибиране на растежа на рак на дебелото черво, апоптоза и повишена транскрипция на p21. HDAC4 е хистон деацетилаза, която е тъканно специфична, потиска клетъчната диференциация и се регулира надолу по време на процеса на клетъчна диференциация. Работата показва, че HDAC4 е важен регулатор на пролиферацията на клетките на дебелото черво (което е важно в процеса на рак) и той от своя страна се регулира от siRNA.

Катедрата по патология на Медицинския факултет на Медицинския университет в Нара в Япония проведе изследване на рак на простатата. Репликативното клетъчно стареене е бариера срещу неконтролираното делене и канцерогенезата. Краткотрайните делящи се клетки (TAC) са част от клетъчната популация на простатата, от която се развива туморът. Японски учени изследвали причините, поради които тези клетки преодоляват стареенето. Клетките на простатата в културата бяха трансфектирани с junB siRNA. Тези клетки показват повишено нивоекспресия на p53, p21, p16 и pRb, открита по време на стареене. Клетките в културата, които показват намалени нива на р16, се използват за следващата стъпка. Повтарящата се трансфекция на siRNA в TAC позволява на клетките да избегнат стареенето при инактивиране на p16/pRb. В допълнение, заглушаването на junB протоонкогена от junB siRNA причинява клетъчна инвазия. Въз основа на това беше направено заключението, че junB е елемент за p16 и насърчава клетъчното стареене, предотвратявайки злокачествеността (злокачествеността) на TAC. По този начин junB е регулатор на канцерогенезата на простатата и може да бъде цел за терапевтична интервенция. И неговата активност може да се регулира с помощта на siRNA.

Провеждат се много такива проучвания. В момента siRNA е не само обект, но и инструмент в ръцете на медицински изследовател, биолог, онколог и геронтолог. Изучаването на връзката на siRNA с онкологични заболявания, с експресията на свързани с възрастта гени, е най-важната задача за науката. Измина доста време от откриването на siRNA и колко интересни проучвания и публикации, свързани с тях, се появиха. Няма съмнение, че тяхното изследване ще се превърне в една от стъпките на човечеството към победата над рака и стареенето...

), предотвратявайки транслацията на иРНК върху рибозомите в протеина, който кодира. В крайна сметка ефектът на малките интерфериращи РНК е идентичен с този на простото намаляване на генната експресия.

Малките интерфериращи РНК са открити през 1999 г. от групата на Дейвид Болкомб в Обединеното кралство като компонент на системата за заглушаване на гени след транскрипция в растенията (англ. PTGS, пост-транскрипционно генно заглушаване). Групата публикува своите открития в списание Science.

Двуверижните РНК могат да увеличат генната експресия чрез механизъм, наречен РНК-зависима генна активация. RNAa, малка РНК-индуцирана генна активация). Доказано е, че двойноверижни РНК, комплементарни на промоторите на целеви гени, предизвикват активиране на съответните гени. РНК-зависимо активиране при прилагане на синтетични двойноверижни РНК е показано в човешки клетки. Не е известно дали подобна система съществува в клетките на други организми.

Със способността да се изключва по същество всеки ген по желание, РНК интерференцията, базирана на малки интерфериращи РНК, генерира огромен интерес в основната и приложна биология. Броят на широкообхватни RNAi-базирани анализи за идентифициране на важни гени в биохимичните пътища непрекъснато нараства. Тъй като развитието на заболяванията също се определя от активността на гените, се очаква, че в някои случаи изключването на ген с помощта на малка интерферираща РНК може да има терапевтичен ефект.

Въпреки това, прилагането на РНК интерференция, основаваща се на малки интерфериращи РНК, върху животни и по-специално за хора, е изправена пред много трудности. Експериментите показват, че ефективността на малките интерфериращи РНК е различна за различните типове клетки: някои клетки лесно реагират на действието на малки интерфериращи РНК и показват намаляване на генната експресия, докато при други това не се наблюдава, въпреки ефективната трансфекция. Причините за това явление все още са слабо разбрани.

Резултатите от първата фаза на изпитванията на първите две RNAi терапевтични лекарства (предназначени за лечение на макулна дегенерация), публикувани в края на 2005 г., показват, че лекарствата, базирани на малки интерфериращи РНК, се понасят лесно от пациентите и имат приемливи фармакокинетични свойства.

Предварителни клинични проучвания на малки интерфериращи РНК, насочени към вируса на Ебола, показват, че те могат да бъдат ефективни за постекспозиционна профилактика на заболяването. Това лекарство позволи оцеляването на цялата група експериментални примати, които са получили смъртоносна доза заирски еболавирус.

Разрушаването на прицелната иРНК може да се случи и под действието на малка интерферираща РНК (Small interfering RNA, siRNA). РНК интерференцията е едно от новите революционни открития в молекулярната биология и нейните автори през 2002 г. получиха за нея Нобелова награда. Интерфериращите РНК се различават рязко по структура от другите видове РНК и представляват две комплементарни РНК молекули с дължина приблизително 21-28 азотни бази, които са свързани помежду си като вериги в ДНК молекула. В същото време два несдвоени нуклеотида винаги остават в краищата на всяка от веригите на siRNA. Въздействието се извършва по следния начин. Когато молекулата siRNA е вътре в клетката, на първия етап тя се свързва в комплекс с два вътреклетъчни ензима - хеликаза и нуклеаза. Този комплекс се наричаше RISC ( РНЕ- ииндуциран с ilencing ° Скомплекс; мълчание - англ мълчи, мълчи; Silence – мълчание, както се нарича процесът на „изключване“ на ген в английската и специалната литература). След това хеликазата се развива и разделя вериги на siRNA и една от нишките (антисенс в структурата) в комплекс с нуклеазата специфично взаимодейства с комплементарния (стриктно съответстващ на него) сайт на целевата иРНК, което позволява на нуклеазата да я отреже на две части. Изрязаните участъци от иРНК са допълнително изложени на действието на други клетъчни РНК нуклеази, които допълнително ги нарязват на по-малки парчета.

siRNA, открита в растенията и нисшите животински организми (насекоми), е важна връзка в един вид "вътреклетъчен имунитет", който позволява разпознаването и бързото унищожаване на чужда РНК. В случай, че вирус, съдържащ РНК, влезе в клетката, такава защитна система ще предотврати размножаването й. Ако вирусът съдържа ДНК, системата siRNA ще попречи на производството му на вирусни протеини (тъй като необходимата за това иРНК ще бъде разпозната и отрязана) и използвайки тази стратегия, тя ще забави разпространението му в тялото. Установено е, че системата siRNA е изключително четлива: всяка siRNA ще разпознае и унищожи само своята собствена специфична иРНК. Заместването само на един нуклеотид в siRNA води до рязко намаляване на интерференционния ефект. Нито един от известните досега генни блокери няма такава изключителна специфичност по отношение на своя целеви ген.

В момента този метод се използва главно в научни изследвания за идентифициране на функциите на различни клетъчни протеини. Въпреки това, потенциално може да се използва и за създаване на лекарства.

Откриването на РНК интерференцията даде нова надежда в борбата срещу СПИН и рак. Възможно е чрез използване на siRNA терапия заедно с традиционните антивирусни и противоракови терапии да се постигне ефект на потенциране, когато две лечения водят до по-изразен терапевтичен ефект от простата сума на всяко от тях, приложено поотделно.

За да се използва механизмът на siRNA-интерференция в клетките на бозайници за терапевтични цели, в клетките трябва да бъдат въведени готови двуверижни siRNA молекули. Съществуват обаче редица проблеми, които в момента не позволяват това да се направи на практика и още повече да се създадат някакви лекарствени форми. Първо, в кръвта те са засегнати от първия ешелон на защитата на тялото, ензими - нуклеази, които отрязват потенциално опасни и необичайни двойни нишки РНК за нашето тяло. Второ, въпреки името си, малките РНК са все още доста дълги и най-важното е, че носят отрицателен електростатичен заряд, което прави невъзможно пасивното им проникване в клетката. И трето, един от най-важните въпроси е как да накараме siRNA да работи (или да проникне) само в определени („болни“) клетки, без да засяга здравите? И накрая проблемът с размера. Оптималният размер на такива синтетични siRNAs е същите 21-28 нуклеотида. Ако увеличите дължината му, клетките ще реагират с производството на интерферон и намаляване на протеиновия синтез. От друга страна, ако се опитате да използвате siRNA, по-малка от 21 нуклеотида, специфичността на нейното свързване с желаната иРНК и способността за образуване на RISC комплекс са рязко намалени. Трябва да се отбележи, че преодоляването на тези проблеми е от решаващо значение не само за siRNA терапията, но и за генната терапия като цяло.

Вече е постигнат известен напредък в справянето с тях. Например, учените се опитват да направят молекулите на siRNA повече липофилен, тоест способни да се разтварят в мазнините, които изграждат клетъчната мембрана, и по този начин да улеснят проникването на siRNA в клетката. И за да осигурят специфичността на работата само в определени тъкани, генните инженери включват специални регулаторни региони в своите структури, които се активират и започват да четат информацията, съдържаща се в такава структура (и следователно siRNA, ако е включена там), само в клетки на определени тъкани.

Така изследователи от Медицинското училище в Сан Диего към Калифорнийския университет (University of California, San Diego School of Medicine) са разработили нов ефективна системадоставка на малка интерферираща РНК (siRNA), която потиска производството на определени протеини, в клетките. Тази система трябва да стане основа за технологията за доставяне на специфично лекарство към различни видове ракови тумори. „Малки интерфериращи РНК, които осъществяват процеса на така наречената РНК интерференция, имат невероятен потенциал за лечение на рак“, обяснява професор Стивън Дауди, който ръководи изследването: „и въпреки че все още имаме много да правим, в момента ние са разработили технологията за доставка на лекарства до популация от клетки - както първичен тумор, така и метастази, без да увреждат здравите клетки.

В продължение на много години Дауди и неговите колеги изучават противораковия потенциал на малки интерфериращи РНК. Въпреки това, конвенционалните siRNAs са малки, отрицателно заредени молекули, които поради своите свойства са изключително трудни за доставяне в клетката. За да постигнат това, учените използваха късия сигнален протеин PTD (пептиден трансдукционен домейн). Повече от 50 "хибридни протеини" бяха създадени преди това с неговото използване, в които PTD беше комбиниран с протеини, потискащи туморния растеж.

Обаче, простата връзка на siRNA с PTD не води до доставянето на РНК в клетката: siRNAs са отрицателно заредени, PTDs са положително заредени, което води до образуването на плътен РНК-протеинов конгломерат, който не се транспортира през клетъчната мембрана . Така изследователите първо свързаха PTD с протеинова РНК-свързващ домен, който неутрализира отрицателния заряд на siRNA (в резултат на слят протеин, наречен PTD-DRBD). Такъв РНК-протеинов комплекс вече лесно преминава през клетъчната мембрана и навлиза в клетъчната цитоплазма, където специфично инхибира протеините на информационната РНК, които активират туморния растеж.

За да определят способността на слетия протеин PTD-DRBD да доставя siRNA в клетките, учените са използвали клетъчна линия, получена от човешки рак на белия дроб. След третиране на клетки с PTD-DRBD-siRNA беше установено, че туморните клетки са най-податливи на siRNA, докато в нормалните клетки (като контроли са използвани Т-клетки, ендотелни клетки и ембрионални стволови клетки), където няма повишени производство на онкогенни протеини, не са наблюдавани токсични ефекти.

Този метод може да бъде подложен на различни модификации, като се използват различни siRNAs за потискане на различни туморни протеини, не само свръхпродуцирани, но и мутирали. Възможно е също така да се модифицира терапията в случай на рецидив на тумори, които обикновено стават резистентни към химиотерапевтичните лекарства поради нови мутации.

Онкологичните заболявания са много променливи, а молекулярните характеристики на протеините на туморните клетки са индивидуални за всеки пациент. Авторите на работата смятат, че в тази ситуация най-много е използването на малки интерфериращи РНК рационален подходкъм терапия.

А.М. Дейчман, С. В. Зиновиев, А. Ю. Баришников

ГЕННА ЕКСПРЕСИЯ И МАЛКА РНК В ОНКОЛОГИЯТА

ГУ РОНЦ им. N.N.Blokhina RAMS, Москва

РЕЗЮМЕ

Статията представя ролята на малките РНК, които контролират повечето от жизнените функции на клетката и тялото, и тяхната възможна връзка, по-специално, с онкогенезата и други (включително хипотетични) вътреклетъчни механизми на геномна експресия.

Ключови думиКлючови думи: малки РНК, РНК интерференция (RNAi), двуверижна РНК (lncRNA), РНК редактиране, онкогенеза.

А.М. Дайхман, С.В.Зиновиев, А.Ю.Баришников.

ГЕННАТА ЕКСПРЕСИЯ И МАЛКИ РНК В ОНКОЛОГИЯТА

Н.Н. Руски изследователски център за рак на Блохин РАМН, Москваow

РЕЗЮМЕ

В статията е представена ролята на малките РНК, контролиращи повечето жизнени функции на клетката и организма и възможната им връзка по-специално с онкогенезата и други (включително хипотетични) вътреклетъчни механизми на геномна експресия.

ключови думи: Малки РНК, интерферентни РНК (RNAi), двуверижни РНК (dsRNAs), редактиране на РНК, туморогенеза.

Въведение

Експресията на отделни гени и цели еукариотни геноми, включително обработка, различни видове транскрипция, сплайсинг, пренареждания, редактиране на РНК, рекомбинации, транслация, РНК интерференция, се регулира от някои протеини (продукти на регулаторни, структурни, хомеотични гени, транскрипционни фактори) , мобилни елементи, РНК и ефектори с ниско молекулно тегло. Обработващите РНК включват рРНК, тРНК, иРНК, някои регулаторни РНК и малки РНК.

Към днешна дата е известно, че малките РНК не кодират протеин, често наброяват стотици на геном и участват в регулирането на експресията на различни еукариотни гени (соматични, имунни, зародишни, стволови клетки). Под контрол са процесите на диференциация (хемопоеза, ангиогенеза, адипогенеза, миогенеза, неврогенеза), морфогенеза (включително ембрионални стадии, развитие/растеж, физиологична регулация), пролиферация, апоптоза, канцерогенеза, мутагенеза, имуногенеза, удължаване на стареенето епигенетично заглушаване; са отбелязани случаи на метаболитна регулация (напр. гликосфинголипиди). По-широк клас некодиращи РНК от 20-300/500 нуклеотида и техните RNP са открити не само в ядрото/нуклеола/цитоплазмата, но също и в ДНК-съдържащи клетъчни органели (животински митохондрии; в растения, микро-РНК и последователности на малка РНК).

За управлението и регулирането на V.N. процеси е важно: 1. че малките естествени/изкуствени РНК (малки РНК, тРНК и др.) и техните комплекси с протеини (RNPs) са способни на трансмембранен клетъчен и митохондриален транспорт; 2. че след колапса на митохондриите част от съдържанието им, РНК и RNP, може да попадне в цитоплазмата и ядрото. Изброените свойства на малките РНК (RNPs), чиято функционално значима роля само нараства в процеса на изследване, очевидно имат връзка с фактора на бдителност по отношение на рак и други генетични заболявания. В същото време стана ясно голямото значение на епигеномните модификации на хроматина в развитието на тумори. Ще разгледаме само много ограничен брой случаи от много подобни.

Малка РНК

Механизмът на действие на малките РНК е способността им да се свързват почти комплементарно с 3'-нетранслирани региони (3'-UTRs) на целевите иРНК (които понякога съдържат ДНК/РНК транспониращи MIR/LINE-2 елементи, както и запазени Alu повторения ) и предизвикват РНК интерференция (RNAi=RNAi; особено при антивирусен отговор). Усложнението обаче е, че освен клетъчни, има и вирусно кодирани малки РНК (херпес, SV40 и др.; EBV например съдържа 23, а KSHV - 12 miRNAs), взаимодействащи с транскриптите на както вируса, така и гостоприемника. Само повече от 5000 клетъчни/вирусни miRNA са известни в 58 вида. RNAi инициира или разграждане (с участието на RISC комплекса, RNA-индуциран комплекс за заглушаване) при нуклеазно уязвими фрагменти от непрекъснати спирали на lncRNA (двуверижна RNA mRNA и др.), или частично обратимо инхибиране на прекъснато навита lncRNA на тРНК мишени. Зрелите малки РНК (~15-28 нуклеотида) се образуват в цитоплазмата от техните предшественици с различна дължина (десетки и стотици нуклеотиди), които се обработват в ядрото. В допълнение, малките РНК участват в образуването на заглушаващата структура на хроматина, регулирането на транскрипцията на отделни гени, потискането на експресията на транспозон и поддържането на функционалната структура на разширените участъци на хетерохроматина.

Има няколко основни типа малки РНК. МикроРНК (miRNAs) и малките интерфериращи РНК (siRNAs) са най-добре проучените. В допълнение, сред малките РНК се изследват следните: piRNAs, активни в клетките на зародишната линия; малки интерфериращи РНК, свързани с ендогенни ретротранспозони и повтарящи се елементи (с локална/глобална хетерохроматизация - започвайки от ранните етапи на ембриогенезата; поддържане на нивото на теломерите), Drosophia rasiRNAs; често кодирани от интрони на протеинови гени и функционално важни по време на транслация, транскрипция, сплайсинг (де-/метилиране, псевдоуридилиране нуклеинова киселина) малки ядрени (snRNAs) и нуклеоларни (snoRNAs) РНК; комплементарни към ДНК-свързващите NRSE-(Neuron Restrictive Silenser Element) мотиви, малки модулиращи РНК, smRNAs, с малко известни функции; трансактивиращи растителни малки интерфериращи РНК, tasiRNAs; къси фиби РНК, shRNAs, осигуряващи дългосрочно RNAi (постоянно генно заглушаване) на дълги lncRNA структури в антивирусния отговор при животни.

Малките РНК (miRNAs, siRNAs и др.) взаимодействат с новосинтезирани транскрипти на ядрото/цитоплазмата (регулиране на сплайсинг, транслация на иРНК; метилиране/псевдоуридилиране на рРНК и т.н.) и хроматин (с временно локална и епигенетично наследена хетерохроматин на divichromatin зародишни клетки). Хетерохроматинизацията, по-специално, е придружена от де-/метилиране на ДНК, както и метилиране, ацетилиране, фосфорилиране и убиквитиниране на хистони (модификация на "хистоновия код").

МиРНК на нематодата Caenorhabditis elegans (lin-4), техните свойства и гени са първите, които са открити и изследвани сред малки РНК, а малко по-късно и miRNAs на растението Arabidopsis thaliana. Понастоящем те се свързват с многоклетъчни организми, въпреки че са показани в едноклетъчните водорасли Chlamydomonas reinhardtii и RNAi-подобни заглушаващи пътища, във връзка с антивирусна/подобна защита, включваща т.нар. psiRNAs се обсъждат за прокариоти. Геномите на много еукариоти (включително дрозофила и хора) съдържат няколкостотин гени на miRNAs. Тези гени, специфични за етап/тъкан (както и съответните им целеви региони на иРНК) често са силно хомоложни във филогенетично отдалечени видове, но някои от тях са специфични за линията. miRNAs се съдържат в екзони (протеин-кодиращи, РНК гени), интрони (най-често пре-мРНК), интергенни спейсери (включително повторения), имат дължина до 70-120 нуклеотида (или повече) и образуват бримка/стебло. структури. За определяне на техните гени се използват не само биохимични и генетични, но и компютърни подходи.

Най-характерната дължина на "работната област" на зрелите miRNAs е 21-22 нуклеотида. Това са може би най-многобройните от некодиращите протеини гени. Те могат да бъдат подредени като отделни копия (по-често) или клъстери, съдържащи много подобни или различни гени на miRNA, транскрибирани (не рядко от автономни промотори) като по-дълъг прекурсор, обработен на няколко етапа до отделни miRNAs. Предполага се, че съществува регулаторна miRNA мрежа, която контролира много фундаментални биологични процеси (включително онкогенеза/метастази); вероятно поне 30% от човешките експресирани гени се регулират от miRNAs.

Този процес включва lncRNA-специфични RNase-III-подобни ензими Drosha (ядрена рибонуклеаза; инициира обработката на интронни pre-miRNAs след сплайсинг на основния транскрипт) и Dicer, който функционира в цитоплазмата и съответно разцепва/разгражда щипката предварително miRNAs (за зрели miRNAs). ) и по-късно хибридни miRNAs/mRNA структури. Малки РНК, заедно с няколко протеина (включително h.p. РНКази, протеини от семейство AGO, трансметилази/ацетилази и др.) и с участието на т.нар. RISC- и RITS-подобните комплекси (вторият индуцира транскрипционно заглушаване) са способни, съответно, да индуцират RNAi/разграждане и последващо заглушаване на гени на нивата на РНК- (преди/по време на транслация) и ДНК- (по време на транскрипция на хетерохроматин).

Всяка miRNA потенциално се сдвоява с множество мишени и всяка мишена се контролира от редица miRNAs (подобно на gRNAs-медиирано пре-mRNA редактиране в трипанозомни кинетопласти). In vitro анализът показа, че регулирането на miRNAs (както и редактирането на РНК) е ключов посттранскрипционен модулатор на генната експресия. Подобни miRNAs, конкуриращи се за една и съща цел, са потенциални трансрегулатори на взаимодействията РНК-РНК и РНК-протеин.

При животни, miRNAs са най-добре проучени за нематодата Caenorhabditis Elegans; са описани над 112 гена. Тук също са открити хиляди ендогенни siRNAs (няма гени; те са свързани по-специално със сперматогенеза-медиирани транскрипти и транспозони). И двете малки многоклетъчни РНК могат да бъдат генерирани от РНК полимерази, които проявяват активност (не хомология) на RdRP-II (както за повечето други РНК) и RdRP-III типове. Зрелите малки РНК са сходни по състав (включително крайни 5'-фосфати и 3'-OH), дължина (обикновено 21-22 нуклеотида) и функция и могат да се конкурират за една и съща цел. Въпреки това, разграждането на РНК, дори когато целта е напълно комплементарна, по-често се свързва със siRNAs; транслационна репресия, с частична, обикновено 5-6 нуклеотида, комплементарност с miRNAs; и прекурсорите, съответно, са екзо-/ендогенни (стотици/хиляди нуклеотиди) за siRNAs и обикновено ендогенни (десетки/стотици нуклеотиди) за miRNAs и тяхната биогенеза е различна; обаче в някои системи тези разлики са обратими.

RNAi, медиирана от siRNAs- и miRNAs, има различни естествени роли: от регулиране на генната експресия и хетерохроматин до защита на генома срещу транспозони и вируси; но siRNAs и някои miRNAs не са запазени между видовете. Растенията (Arabidopsis thaliana) имат: siRNA, съответстващи както на гени, така и на интергенни (включително спейсери, повторения) региони; голям брой потенциални геномни сайтове за различни видовемалки РНК. Нематодите също имат т.нар. променлива автономно експресирана 21U-RNAs (dasRNAs); те имат 5 "-Y-монофосфат, съставляват 21 нуклеотида (20 от тях са променливи) и са разположени между или вътре в интроните на протеин-кодиращи гени на повече от 5700 места в два региона на хромозома IV.

MiRNAs играят важна роля в генната експресия в здравето и болестта; човек има поне 450-500 такива гена. Като се свързват обикновено с 3 "-UTR региони на иРНК (други мишени), те могат селективно и количествено (по-специално, когато премахват продуктите на нискоекспресирани гени от циркулацията), да блокират работата на някои и активността на други гени. Оказа се, че наборите от профили на експресирани микро-РНК (и техните мишени) динамично се променят по време на онтогенезата, диференциацията на клетките и тъканите. Тези промени са специфични, по-специално по време на кардиогенезата, процеса на оптимизиране на размера на дължината на дендрити и броя на синапсите на нервната клетка (с участието на miRNA-134, други малки РНК), развитието на много патологии (онкогенеза, имунодефицити, генетични заболявания, паркинсонизъм, болест на Алцхаймер, офталмологични нарушения (ретинобластом и др.) свързани с инфекции от различно естество) Общият брой на открити miRNAs нараства много по-бързо от описанието на тяхната регулаторна роля и асоциация със специфични цели.

Компютърният анализ предсказва стотици целеви иРНК за отделни miRNAs и регулиране на отделни иРНК от множество miRNA. По този начин, miRNAs могат да служат за елиминиране на целеви генни транскрипти или фина настройка на тяхната експресия на транскрипционни/транслационни нива. Теоретичните съображения и експерименталните резултати подкрепят съществуването на различни роли за miRNAs.

По-пълен списък от аспекти, свързани с основната роля на малките РНК в еукариотите в процесите на растеж/развитие и при някои патологии (включително епигеномика на рака), е отразен в прегледа.

Малки РНК в онкологията

Процесите на растеж, развитие, прогресия и метастази на тумори са придружени от много епигенетични промени, които се развиват в по-редки, трайно наследени генетични промени. Редките мутации обаче могат да имат голяма тежест (за конкретен индивид, нозология), т.к. по отношение на отделни гени (например APC, K-ras, p53), т.нар. ефектът на „фуния“, свързан с почти необратимо развитие/последствия от онкологични заболявания. Тумор-специфичната по отношение на експресионния профил на различни гени (протеини, РНК, малка РНК) хетерогенността на прогениторните клетки се дължи на конюгирани вариации на пренаредени епигеномни структури. Епигеномът се модулира чрез метилиране, посттранслационни модификации/замествания на хистони (с неканонични), ремоделиране на нуклеозомната структура на гени/хроматин (включително геномно отпечатване, т.е. дисфункция в експресията на алели на родителски гени и X хромозоми). Всичко това и с участието на RNAi, регулирани от малки РНК, води до появата на дефектни хетерохроматични (включително хипометилирани центромерни) структури.

Образуването на генно-специфични мутации може да бъде предшествано от известното натрупване на стотици хиляди соматични клонални мутации в прости повторения или микросателити на некодиращия (рядко кодиращ) регион, поне при тумори с микросателитен мутаторен фенотип (MMP) ; съставляват значителна част от колоректалния рак, както и рака на белия дроб, стомаха, ендометриума и др. Нестабилни моно-/хетеронуклеотидни микросателитни повторения (поли-А6-10, подобни) се срещат многократно по-често при регулаторни не- кодиращи гени, които контролират експресията на гени (интрони, интергенни), отколкото в кодиращите (екзони) региони на генома на микросателитно-нестабилни, MSI+, тумори. Въпреки че естеството на появата и механизмите на локализация на MS-стабилни/нестабилни региони не са напълно ясни, образуването на MS-нестабилност корелира с честотата на мутациите на много гени, които не са мутирали по-рано в MSI+ тумори и вероятно са канализирали пътищата на тяхното развитие; освен това, скоростта на мутациите на MSI повторенията в тези тумори се увеличава с повече от два порядъка. Не всички гени са анализирани за наличие на повторения, но степента на тяхната изменчивост в кодиращи/некодиращи региони е различна, а точността на методите за определяне на честотата на мутациите е относителна. Важно е, че некодиращите региони за MSI-променяеми повторения често са двуалелни, докато кодиращите региони са моноалелни.

Глобалното намаляване на метилирането в туморите е характерно за повторения, транспонируеми елементи (МЕ; тяхната транскрипция се увеличава), промотори, CpG сайтове на туморни супресорни miRNA гени и корелира с хипертранскрипция на ретротранспозони в напреднали ракови клетки. Обикновено флуктуациите на „метилома“ са свързани с родителски/стадий/тъкан-специфични „вълни на метилиране“ и силно метилиране на центромерни сателитни региони на хетерохроматин, регулирани от малки РНК. Когато сателитите са недостатъчно метилирани, образуваната хромозомна нестабилност е придружена от увеличаване на рекомбинацията и нарушението на ТЕ метилирането може да предизвика тяхната експресия. Тези фактори благоприятстват развитието на туморния фенотип. Терапията с малка РНК може да бъде силно специфична, но трябва да се контролира, т.к мишени могат да бъдат не само отделни, но и много тРНК/РНК молекули и новосинтезирана РНК от различни (включително некодиращи интергенни повторения) региони на хромозоми.

По-голямата част от човешкия геном се състои от повторения и ТЕ. Ретротранспозон L1 (LINE елемент) съдържа, подобно на ендогенните ретровируси, реверстаза (RTase), ендонуклеаза и е потенциално способен да носи неавтономни (Alu, SVA и др.) ретроелементи; заглушаването на L1/подобни елементи възниква в резултат на метилиране в CpG места. Имайте предвид, че сред CpG сайтовете на генома, CpG островите на генни промотори са слабо метилирани, а самият 5-метилцитозин е потенциално мутагенна база, която се деаминира в тимин (химически или с участието на РНК/(ДНК) редактиране, ДНК ремонт); обаче някои от CpG островите са обект на прекомерно аберантно метилиране, придружено от потискане на супресорния ген и развитие на рак. Следваща: РНК-свързващ протеин, кодиран от L1, взаимодействащ с протеини AGO2 (от семейството Argo-naute) и FMRP (крехка умствена изостаналост, протеин на ефекторния RISC комплекс), насърчава движението на L1 елемента - което показва възможна взаимна регулиране на системите RNAi и ретропозиции на човешки LINE елементи. Важно е по-специално, че Alu повторенията могат да се движат в областта на интронно/екзонното пространство на гените.

Тези и подобни механизми могат да подобрят патологичната пластичност на генома на туморната клетка. Потискането на RTase (кодирана, подобно на ендонуклеаза, от L1 елементи; RTase също се кодира от ендогенни ретровируси) чрез RNAi механизма е придружено от намаляване на пролиферацията и увеличаване на диференциацията в редица ракови клетъчни линии. При въвеждане на L1 елемента в протоонкоген или супресорен ген, се наблюдават двойноверижни прекъсвания на ДНК. В тъканите на зародишната линия (мишки/човек) нивото на експресия на L1 се повишава и неговото метилиране зависи от системата за заглушаване, свързана с piRNAs-(26-30-bp), където PIWI протеините са варианти на голямото семейство на Argo -naute протеини, мутации в които водят до деметилиране/дерепресия на L1/подобни елементи с дълги терминални повторения. Пътищата на заглушаване на rasiRNAs са свързани с PIWI протеини в по-голяма степен, отколкото с Dicer-1/2 и Ago протеини. Медиираните от piRNAs/siRNAs заглушаващи пътища се реализират чрез вътреядрени тела, съдържащи големи еволюционно запазени мултипротеинови PcG комплекси, чиито функции често са нарушени в туморните клетки. Тези комплекси са отговорни за действие на дълги разстояния (чрез повече от 10 kb, между хромозомите) и регулират клъстера от HOX гени, отговорни за плана на тялото.

Нови принципи на антисенс терапията могат да бъдат разработени, като се вземат предвид познанията за по-силно специфични (от хистон-модифициращите инхибитори на ДНК/протеиновото метилиране) антитуморни епигеномни агенти, основните принципи на заглушаване на епигеномната РНК и ролята на малките РНК в канцерогенезата.

Микро-РНК в онкологията

Известно е, че увеличаването на туморния растеж и метастазите може да бъде придружено от увеличаване на някои и намаляване на експресията на други индивиди/набори от miRNAs (Таблица 1). Някои от тях може да имат каузална роля в онкогенезата; и дори същите miRNAs (като miR-21/-24) в различни туморни клетки могат да проявяват както онкогенни, така и потискащи свойства. Всеки тип човешки злокачествени тумори е ясно различим със своя "miRNA-отпечатък", а някои miRNAs могат да функционират като онкогени, туморни супресори, инициатори на клетъчна миграция, инвазия, метастази. В патологично променените тъкани често се открива намален брой ключови miRNAs, вероятно включени в системите за защита срещу рак. miRNAs (miRs), участващи в онкогенезата, са формирали концепцията за т.нар. "oncomirax": анализът на експресията на повече от 200 miRNAs от повече от 1000 проби от лимфоми и солидни ракови заболявания направи възможно успешното класифициране на тумори в подтипове според техния произход и етап на диференциация. Функциите и ролята на miRNAs са успешно проучени с помощта на: анти-miR олигонуклеотиди, модифицирани (за удължаване на живота) при 2'-O-метил и 2'-O-метоксиетил групи; както и LNA олигонуклеотиди, в които кислородните атоми на рибозата в позиции 2 "и 4" са свързани с метиленов мост.

(Маса 1)……………….

маса 1 .

miRNAs, чиято експресия се увеличава () или намалява ( ↓ ) при някои от по-често срещаните тумори в сравнение с нормалните тъкани (вижте и също).

Смята се, че регулаторната роля на експресията, изчезването и амплификацията на гените на miRNA в предразположението към иницииране, растеж и прогресия на повечето тумори е значителна и мутациите в двойките miRNA/mRNA-мишени са синхронизирани. Профилът на експресия на miRNAs може да се използва за класификация, диагностика и клинична прогноза в онкологията. Промените в експресията на miRNAs могат да повлияят на клетъчния цикъл, програмата за оцеляване на клетката. Мутациите на miRNAs в стволови и соматични клетки (както и подбор на полиморфни целеви варианти на иРНК) могат да допринесат или дори да играят критична роля в растежа, прогресията и патофизиологията на много (ако не всички) злокачествени новообразувания. С помощта на miRNAs е възможна корекция на апоптоза.

В допълнение към отделните miRNAs, бяха открити техните клъстери, действащи като онкоген, който провокира развитието, по-специално, на рак на хемопоетичната тъкан при опитни мишки; гените на miRNAs с онкогенни и супресорни свойства могат да бъдат разположени в един и същи клъстер. Клъстерният анализ на профилите на експресия на miRNAs в тумори дава възможност да се определи неговият произход (епител, хематопоетична тъкан и др.) и да се класифицират различни тумори от една и съща тъкан с неидентични механизми на трансформация. Профилирането на експресията на miRNAs може да се извърши с помощта на нано-/микромасиви; точността на такава класификация, когато се разработи технологията (което не е лесно), се оказва по-висока, отколкото при използването на mRNA профили. Някои от miRNAs участват в диференциацията на хематопоетичните клетки (миши, човешки), като инициират прогресията на раковите клетки. Човешките miRNA гени често се намират в т.нар. „крехки“ места, области с преобладаване на делеции / вмъквания, прекъсвания на точки, транслокации, транспозиции, минимално изтриващи се и амплифицирани хетерохроматинови региони, участващи в онкогенезата.

Ангиогенеза . Ролята на miRNAs в ангиогенезата вероятно е значителна. Увеличаването на ангиогенезата при някои Myc-активирани човешки аденокарциноми е придружено от промяна в модела на експресия на някои miRNAs, докато генният нокдаун на други miRNAs води до отслабване и потискане на туморния растеж. Растежът на тумора е придружен от мутации в K-ras, Myc и TP53 гени, повишено производство на ангиогенен VEGF фактор и степента на Myc-асоциирана васкуларизация; докато антиангиогенните фактори Tsp1 и CTGF бяха потиснати от miR-17-92 и други свързани с клъстер miRNAs. Туморната ангиогенеза и васкуларизацията бяха засилени (особено в колоноцитите), когато два онкогена бяха коекспресирани в по-голяма степен от един.

Неутрализацията на антиангиогенния фактор LATS2, инхибитор на животинска циклин-зависима киназа (CDK2; човек/мишка), с miRNAs-372/373 ("потенциални онкогени") стимулира растежа на тумора на тестисите, без да уврежда гена p53.

Потенциални модулатори на ангиогенните свойства (in-vitro/in-vivo) са miR-221/222, чиито мишени, c-Kit рецептори (други), са фактори на ангиогенеза на ендотелни венозни HUVEC клетки на пъпната връв и др. Тези miRNAs и c- Комплектът взаимодейства като част от сложен цикъл, който контролира способността на ендотелните клетки да образуват нови капиляри.

Хронична лимфоцитна левкемия (ХЛЛ). При В-клетъчна хронична лимфоцитна левкемия (ХЛЛ) се забелязва намалено ниво на експресия на гените miR-15a/miR-16-1 (и други) в областта 13q14 на човешката хромозома - мястото на най-често срещаните структурни аномалии (включително делеции на 30kb региона), въпреки че геномът експресира стотици зрели и предчовешки miRNAs. И двете miRNAs, потенциално ефективни при туморна терапия, съдържат антисенс области на антиапоптотичния Bcl2 протеин, потискат неговата свръхекспресия, стимулират апоптозата, но почти/напълно липсват в две трети от бездомните CLL клетки. Чести мутации на секвенирани miRNAs в стволови/соматични клетки са идентифицирани при 11 от 75 пациенти (14,7%) със семейно предразположение към CLL (неизвестен начин на унаследяване), но не и при 160 здрави пациенти. Тези наблюдения повдигат предположението за директна функция на miRNAs в левкемогенезата. Понастоящем не се знае всичко за връзката между нивата на генна експресия на miRNAs (и техните функции) и други гени в нормални/туморни клетки.

Уместност. Нарушаването на функцията на лицевия нерв по време на операция на паротидната слюнчена жлеза е един от реални проблемии се определя както от разпространението на заболяването, така и от значителната честота